[发明专利]一种同时测定丹参中6种内源激素含量的HPLC方法

说明书

本发明提供了一种同时测定丹参中多种内源激素含量的HPLC方法，步骤如下：a、制备供试品溶液；b、制备对照品溶液；c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测；d、根据检测结果计算得到丹参中的各激素含量。本发明方法可以同时测定川丹参花中的6种内源激素，准确可靠、简便快速，为丹参的雄性不育机理研究提供了有效的理论依据，也为开展丹参雄蕊育性的外源激素调控、优选品种的选育奠定了良好基础。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种同时测定丹参中6种内源激素含量的HPLC方法。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为唇形科鼠尾草属多年生草本植物，主产于四川、山东、河南、陕西等省，其干燥根和根茎为著名中药材，具有祛瘀止痛、养血安神、活血通经等功效，主要用于心脑血管、冠心病、肝硬化及妇科病的治疗，是药用植物理想的模式植物。

近年来，随着丹参及其衍生产品临床需求的增加，使得国内药材市场对丹参原药材的需求也迅速增加，丹参种植面积逐年扩大，然而地域和栽培方式的多样性，各地普遍存在种植品种混杂、退化等严重问题。因此，如何稳产增产和防止品种退化以及丹参优良新品种的创制是亟待解决的问题。

丹参传统繁殖方法主要为种子和分根繁殖，山东、河南、陕西等主产区丹参主要以种子繁殖为主，然而四川丹参(川丹参)在栽培过程中通常只开花不结实，只能采用分根繁殖，且长期单一的无性繁殖方式导致了严重的病虫害问题，造成药材质量和产量下降，严重影响了川丹参产业的发展，亟待开展川丹参育种工作。

植物内源激素作为重要的信号分子，控制着植株的整个生育过程。对丹参中内源激素的含量变化进行研究，对弄清丹参内源激素在雄性不育发生过程中的可能作用机制、优秀种质资源的选育具有重要意义。

目前对丹参中内源激素进行检测时，测定的激素种类仅涉及生长素、脱落酸等不超过4种，种类较少，为了更全面分析相关作用机制，有必要对检测激素的种类进行扩展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定丹参中多种内源激素含量的HPLC方法。

本发明提供了一种同时测定丹参中多种内源激素含量的HPLC方法，步骤如下：

a、制备供试品溶液：

取丹参花，以甲醇为溶剂提取，离心、浓缩，再分别经石油醚、乙酸乙酯萃取，浓缩，用乙腈溶解、过滤，得供试品溶液；

b、制备对照品溶液：

取各激素对照品，混合，加乙腈溶解，配制成混合对照品溶液；

c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序为：

0～15min，5％～10％B：

15～30min，10％～25％B；

30～40min，25％～35％B；

40～42min，35％～40％B；

检测波长：分别为210nm和254nm；

d、根据检测结果计算得到丹参花中的各激素含量。

其中，所述内源激素为玉米素、玉米素核苷、激动素、生长素、赤霉素和/或脱落酸。

其中，步骤a中，以甲醇为溶剂提取的方法为：取丹参花1重量份，研磨后，加入PVPP0.2重量份、体积分数为80％的甲醇溶液30体积份，4℃放置24h，得上清液备用；