[发明专利]一种3D全层皮肤模型及用于其形成的培养基、制备方法

权利要求书

1.一种用于3D全层皮肤模型形成的无血清培养基，其特征在于，其包括蛋白制剂，所述蛋白制剂包括0.1～99％白蛋白、0.1～99％球蛋白以及0.1～99％纤连蛋白，所述百分比为质量百分比。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基为所述3D全层皮肤模型的气液相界面培养的培养基；

所述培养基还包括基础培养液，所述基础培养液较佳地为质量比为1:2的F12和DMEM混合培养液；

所述培养基还包括氢化可的松或者氢化可的松盐酸盐，和/或胰岛素；

和/或，所述蛋白制剂的来源为动物源或者人源，较佳地为人源。

3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括下述组分：60～66％DMEM、30～33％F12、1～10％蛋白制剂、氢化可的松0.2～0.6μg/ml和胰岛素1～50μg/ml，其中，所述蛋白制剂包括30～80％白蛋白、10～50％球蛋白以及5～20％纤连蛋白；更佳地，所述蛋白制剂的含量为10％，所述蛋白制剂由60％白蛋白，30％球蛋白以及10％纤连蛋白组成，所述氢化可的松的浓度0.5μg/ml，所述胰岛素的浓度为8μg/ml；所述百分比为质量百分比。

4.一种3D全层皮肤模型的制备方法，其包括气液相界面培养包含真皮层和表皮层的皮肤模型，其特征在于，所述气液相界面培养的培养基IV为权利要求1～3任一项所述的培养基；

较佳地，所述气液相界面培养于培养支架表面进行；

和/或，所述气液相界面培养7天，每2天换液一次，直到得全层皮肤模型。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述真皮层通过将单细胞状态的成纤维细胞与猪I型胶原混合后培养2～3h至凝固，再加入培养基I进行培养制得；较佳地：

所述猪I型胶原的密度为2～5mg/ml，较佳地为3.5mg/ml；

所述的培养基I包括90％DMEM和10％FBS，所述百分比为体积百分比；

所述混合后的成纤维细胞的密度为(0.5～3)×10⁶个/ml，较佳地为1.7×10⁶个/ml；

和/或，所述成纤维细胞与猪I型胶原混合后培养的条件为5％CO₂、37℃培养箱中培养3～4天。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述成纤维细胞为经过培养的成纤维细胞；较佳地，为将第4～16代成纤维细胞以(0.5～1.5)×10⁶个/ml接种于权利要求5中所述的培养基I中培养5～7天。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述表皮层为通过将角质细胞接种于所述真皮层表面培养制得；较佳地：

所述角质细胞接种的密度为(0.1～1.5)×10⁵个/cm²，较佳地为0.8×10⁵个/cm²；

所述角质细胞培养的培养基II包括下述组分：60％DMEM、30％F12、10％FBS、氢化可的松0.2～0.6μg/ml、胰岛素1～50μg/ml、腺嘌呤10～50μg/ml、异丙肾上腺素0.1～0.5μg/ml、三碘甲腺原氨酸0.5～2ng/ml以及表皮生长因子10～60ng/ml；所述百分比为体积百分比；

和/或，所述角质细胞培养的时间为5～10天；较佳地为7天。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述角质细胞为第2～4代角质细胞；较佳地，所述角质细胞为经Gibco的KSFM培养基或者权利要求7中所述的培养基II培养出的细胞。

9.如权利要求4～8任一项所述的制备方法制得的3D全层皮肤模型。

10.如权利要求9所述的皮肤模型在化妆品领域以及药物研究领域中的应用。