[发明专利]一种用于植物材料梯度脱水的石蜡切片方法

权利要求书

1.一种用于植物材料梯度脱水的石蜡切片方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

1)样品的采集及固定：采集新鲜材料浸入固定液中，真空抽气15～20min，然后于固定液中固定24～36h；固定液为卡诺试剂、多聚甲醛溶液、FAA混合溶液中的一种，其中FAA混合溶液为福尔马林:冰醋酸:70％乙醇按1:1:18的体积比混合制得；

2)样品的脱水：将固定后的材料依次通过质量分数为30％、50％、70％、85％、90％、100％、100％的梯度乙醇溶液进行脱水，每个梯度的乙醇溶液中分别脱水0.2～2h；

3)透明及染色：将脱水后的材料先于1/2无水乙醇与1/2二甲苯与0.05wt％～0.1wt％的番红混合溶液中透明处理10～30min，再于纯二甲苯溶液中透明处理两次，每次处理10min；

4)浸蜡与包埋：透明后将材料浸入1/2二甲苯与1/2石蜡混合液中30min，再放入熔点为52～56℃的熔融纯蜡中浸蜡1～2h后，将浸蜡后的材料放入58℃的恒温箱中保温，然后将蜡盒倒满熔融石蜡，用镊子夹取材料移入盒内石蜡中，摆放好，并在蜡面上吹气使蜡的表面凝成薄层，再将蜡盒移入凉水中并将纸盒压入水底，完全凝固后即获蜡块；

5)修块及固定：取出包含有材料及蜡块的纸盒，除去包被蜡块周围的纸，露出包含有材料的蜡块，依据材料所处位置，将蜡块切割并修成下宽上窄的梯形，使每个小块包含一个材料，并使上部矩形对边平行，滴几滴融化的蜡于小木块上，将梯形蜡块底部粘贴于小木块上，使其粘贴牢固；

6)切片、展片及烘干：将梯形蜡块于转式切片机上进行连续切片，切片厚度为6～10μm，然后将连续切片放入载玻片上，再将置有切片的载玻片放在40～48℃的展片台上，待蜡带完全展开后，倾去多余的水分，室温晾干或置于35℃烘箱中烘干备用，所述载玻片在使用前，先于载玻片上涂抹甘油蛋白，然后滴加3～5滴蒸馏水；

7)脱蜡、复染及封固：将充分干燥的切片放入二甲苯脱蜡处理20～30min，脱蜡后的切片用梯度酒精进行复水、复染及脱水，再过度至纯二甲苯中透明处理2次，每次3～5min，然后捞出载玻片，于材料中部滴一滴加拿大树胶，盖上盖玻片，制成永久制片。

2.根据权利要求1所述的一种用于植物材料梯度脱水的石蜡切片方法，其特征在于，所述步骤7)中的复水、复染及脱水的方法为：将脱蜡后的切片依次通过1/2二甲苯与1/2无水乙醇3～5min、无水乙醇3～5min、无水乙醇3～5min、95％乙醇3～5min，85％乙醇3～5min、70％乙醇与0.5wt％～1wt％的番红0.2～2h、85％乙醇3～5min、95％乙醇与0.5wt％～1wt％的固绿3～10s、无水乙醇3～5min、无水乙醇3～5min、1/2二甲苯与1/2无水乙醇3～5min，再过度至纯二甲苯中进行透明处理。