[发明专利]一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：其包括以下步骤：

（1）：DNA提取；

（2）：在相同的反应体系中，使用叶酸代谢基因多态性位点的基因野生型模板的特异性ARMS引物和突变型模板的特异性ARMS引物分别对同一份待测样本进行实时荧光定量PCR检测；

所述野生型模板的特异性ARMS引物的3`末端终止在待测位点处并且与野生型序列匹配，其中，在所述引物的3`末端第2-5位设置一个或多个错配碱基；

所述突变型模板的特异性ARMS引物的3`末端终止在待测位点处并且与突变型序列匹配，其中，在所述引物的3`末端第2-5位设置一个或多个错配碱基；

所述野生型模板的特异性ARMS引物和所述突变型模板的特异性ARMS引物共用上游或下游引物，所述共用上游或下游引物分别与所述野生型模板的特异性ARMS引物或所述突变型模板的特异性ARMS引物一起扩增一段包含待测基因突变位点的序列；

（3）：根据样本用野生型模板的特异性ARMS引物进行荧光定量PCR检测的Ct野生型和突变型模板的特异性ARMS引物进行ARMS荧光定量PCR检测的Ct突变型，来判断多态性位点的型别从而确定叶酸代谢基因突变的基因型。

2.根据权利要求1所述的一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：DNA提取方法包括如下：

（1）口腔拭子在受检者口腔左右两腮分别各上下刮20次，保证采集到足量的口腔脱落细胞样本，采集完毕，样本置于样本保存管，做好标记；

（2）将步骤（1）中的样本保存管用涡旋振荡器涡旋混匀30s，使口腔拭子中脱落细胞充分混合至保存液中；

（3）将步骤（2）的保存液全部转移至新的1.5mL离心管，然后6000g离心2min弃上清，获得细胞沉淀，此时在管底留10ul保存液，无须完全弃掉；

（4）向步骤（3）获得细胞沉淀中加入100uL浓度为400mM 的NaOH溶液，涡旋振荡10s，水浴100℃煮沸裂解6min；

（5）将步骤（4）水浴锅中的离心管取出，冰上冷却30s，然后12000g离心1min，取上清液即为提取的口腔拭子基因组DNA。

3. 根据权利要求1所述的一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：使用叶酸代谢多态性位点的基因野生型模板的特异性ARMS引物和突变型模板的特异性ARMS引物分别对同一份待测样本进行实时荧光定量PCR检测时，为了防止基因组的污染，在反应体系中引入了热启动防污染型试剂，包括2U/ul UDG酶和抗体修饰的热启动酶。

4.根据权利要求1所述的一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：野生型模板的特异性ARMS引物和突变型模板的特异性ARMS引物中，引入错配碱基的位置和类型相同；除了突变位点处的碱基以外，所述野生型模板的特异性ARMS引物和所述突变型模板的特异性ARMS引物完全相同。

5.根据权利要求1所述的一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：所述叶酸代谢多态性位点是MTHFR基因rs1801131：A>C和rs1801133：C>T，MTRR基因rs1801394：A>G。