[发明专利]一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法

权利要求书

1.一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）无菌取出21-24HH早期胚胎，使用PBS浸洗3次；

（2）在解剖显微镜下去头尾，剥离出生殖嵴，获取早期生殖嵴组织，使用PBS浸洗3次；

（3）加入预热的胰蛋白酶进行消化，室温消化5mins，消化时轻轻吹打使生殖嵴组织分散；

（4）加入含有小牛血清的培养基终止消化，100目网筛过滤后300转离心5mins，弃上清后使用PGCs培养基进行重悬，重悬后进行差速贴壁培养，培养45mins后吸上清，连续差速贴壁培养3次后即可得到纯度较高的PGCs。

2.根据权利要求1所述的一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，其特征在于：所述生殖嵴部位为早期胚胎后肠前1/3的背外侧组织部位。

3.根据权利要求1或2所述的一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，其特征在于：所述胰蛋白酶的质量浓度为0.25%，胰蛋白酶的加入体积为1-2ml。

4.根据权利要求3所述的一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，其特征在于：所述含有小牛血清的培养基的质量浓度为5%，含有小牛血清的培养基的体积为1-2ml。

5.根据权利要求4所述的一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，其特征在于：所述胰蛋白酶的预热温度为37℃。