[发明专利]一种娃儿藤的组培快繁方法

权利要求书

1.一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.无菌苗的获取：选择娃儿藤茎苗，当茎苗生长至2-4对叶时，先用毛刷粘75-80％酒精清洗茎苗，待30-60min后用灭菌过的剪刀从顶端剪取长2-4cm鲜嫩芽做为外植体，贮藏在2-5℃环境下，备用；

S2.消毒杀菌：取外植体置于超净工作台上，先用流水冲洗25-45min，接着用镊子在75-85％的酒精来回晃动消毒15-25s，再用无菌水冲洗5-9遍，最后用0.7-0.9％次氯酸钠溶液消毒8-13min，取出外植体用无菌滤纸吸干表面水分，得消毒外植体，备用；

S3.诱导培养：取消毒外植体剪口端切除2-5mm后斜插入诱导培养基上，转移至湿度为24±0.5℃、光线较暗的室内先培养2-4天，然后移入光照时间4-7h/d、光照强度1200-1600Lx，空气湿度65-75％的环境下继续培养7-13天，得到丛生芽，备用；

S4.增殖培养：取S3中丛生芽切取1-2个芽，接种至增殖培养基中进行增殖培养，培养环境为：温度24±0.5℃，光照时间5-8h/d，光照强度1200-1600Lx、空气湿度65-75％，培养25-35天，待长出2-4对叶后从基部切下，得到增殖体，备用；

S5.生根培养：取S4中得到的增殖体接种至生根培养基上进行诱导生根，然后置于光照温度25±0.5℃，黑暗温度18±0.5℃，光照时间7-9h/d，光照强度1500-1800Lx、空气湿度55-70％的环境下培养生根，培养至娃儿藤根部生根3-12条时，得生根苗，备用；

S6.炼苗移栽：取步骤S5中得到的生根苗，移至温度为25-28℃、空气相对温度为70-80％、光照强度为2000-2600Lx、通风良好的环境下先开1/4-1/3瓶盖，适应0.5-1天后打开1/2-2/3瓶盖，0.5-1.5天后全开瓶盖，继续炼苗1-3天；然后取出组培苗洗净培养基，移栽至苗床中栽种，在苗床中种植一段时间后，可进行移栽种植，得娃儿藤移栽苗。

2.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，所述次氯酸钠溶液中还含有质量百分比浓度为0.05-0.09％的伊曲康唑和0.04-0.08％红霉素。

3.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，S5步骤中培养生根时间为7-25天。

4.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，所述苗床由腐殖土、岩石、海藻肥、草木灰、甘蔗渣按照质量比为3：1：0.5：0.4：1组成。

5.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，苗床所处的环境为移至温度为25-28℃、空气相对温度为70-80％、光照强度为2000-2600Lx。

6.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，所述诱导培养基在1/2MS培养基中加入以下组分：琼脂6-8g/L、红糖10-15g/L、茉莉酸2-8mg/L、6-苄基嘌呤1-4mg/L、油菜素甾醇4-10mg/L、桑葚汁40-60mg/L、苹果泥10-15mg/L、土豆泥15-25mg/L。

7.根据权利要求1一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，所述增殖培养在1/2MS培养基中加入以下组分：琼脂6-8g/L、茉莉酸2-8mg/L、6-苄基嘌呤1-4mg/L、油菜素甾醇4-10mg/L、桑葚汁40-60mg/L、香蕉泥10-15g/L、苹果泥10-15mg/L、土豆泥15-25mg/L。

8.根据权利要求1所述的一种娃儿藤的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养基在1/2的White培养基中加入：琼脂3-6g/L、红薯泥24-30mg/L、茉莉酸12-18mg/L、6—苄基氨基嘌1-3mg/L、吲哚丁酸2-5mg/L、乙烯利2-4mg/L、油菜素甾醇3-8mg/L、水解乳蛋白4-14mg/L、铜钱草液8-18mg/L、火龙果汁4-18mg/L、维生素B6为0.5-1.0mg/L。