[发明专利]一种娃儿藤的组培快繁方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及种子处理技术领域，具体涉及一种娃儿藤的组培快繁方法。

【背景技术】

娃儿藤为萝摩科(Asclepiadaceac)娃儿藤属(Tylophora)多年生葡萄性藤状草本，主要以根及全草入药，主要分别于我国云南、广西、广东、湖南、江西、浙江、台湾、越南、老挝、缅甸、印度等地,喜温暖，能耐阴，较耐寒，常生长在海拔900来以下的山地灌丛中，或山谷及向阳疏密杂树林中。娃儿藤蔓条缭绕，适于篱墙栏杆、门架、花廊配植，也可点缀在假山和岩坡隙缝间，攀绕其上，蔓条下垂，颇为别致。

娃儿藤入药在我国有悠久的历史,《江西草药》记载其具有祛风化痰、通经散癖的功效。《南宁市药物志》记载其有行气、散癖、止痛、化痰、止咳、治跌打、刀伤、咳嗽、风湿痛的功效。江西《草药手册》记载其能散癖、催吐治哮喘痰咳、咽喉肿痛、跌打损伤、风湿痛、胃痛、腹痛等。现代药理研究表明，娃儿藤主要生物活性成分是生物碱类化合物，人们已经通过化学合成方法合成包括娃儿藤碱在内的一系列娃儿藤碱衍生物，而且这些娃儿藤碱的衍生物具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗癌等等明显的药理活性。

娃儿藤在广西民间用于镇癌痛，且有疗效佳，由于连年挖掘，野生资源自然授粉率低，传统生长环境受到破坏，目前娃儿藤药材价格居高不下，且已处于濒危状态。采用组织培养技术系列娃儿藤成为重要的良种繁育途径之一，目前对娃儿藤的组织培养研究较少，缺少一种能有效将娃儿藤组培苗进行组培培养的技术，严重制约了娃儿藤训养种植的进程。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述背景技术中存在技术问题，本发明提供一种娃儿藤的组培快繁方法，本方法可以显著提高娃儿藤育苗效率，缩短育苗周期，为娃儿藤快繁育苗的生产提供技术支持，解决目前娃儿藤人工种植率低的问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种娃儿藤的组培快繁方法，包括以下步骤：

S1.无菌苗的获取：选择娃儿藤茎苗，当茎苗生长至2-4对叶时，先用毛刷粘75-80％酒精清洗茎苗，待30-60min后用灭菌过的剪刀从顶端剪取长2-4cm鲜嫩芽做为外植体，贮藏在2-5℃环境下，备用；

S2.消毒杀菌：取外植体置于超净工作台上，先用流水冲洗25-45min，接着用镊子在75-85％的酒精来回晃动消毒15-25s，再用无菌水冲洗5-9遍，最后用0.7-0.9％次氯酸钠溶液消毒8-13min，取出外植体用无菌滤纸吸干表面水分，得消毒外植体，备用；

S3.诱导培养：取消毒外植体剪口端切除2-5mm后斜插入诱导培养基上，转移至湿度为24±0.5℃、光线较暗的室内先培养2-4天，然后移入光照时间4-7h/d、光照强度1200-1600Lx，空气湿度65-75％的环境下继续培养7-13天，得到丛生芽，备用；

S4.增殖培养：取S3中丛生芽切取1-2个芽，接种至增殖培养基中进行增殖培养，培养环境为：温度24±0.5℃，光照时间5-8h/d，光照强度1200-1600Lx、空气湿度65-75％，培养25-35天，待长出2-4对叶后从基部切下，得到增殖体，备用；

S5.生根培养：取S4中得到的增殖体接种至生根培养基上进行诱导生根，然后置于光照温度25±0.5℃，黑暗温度18±0.5℃，光照时间7-9h/d，光照强度1500-1800Lx、空气湿度55-70％的环境下培养生根，培养至娃儿藤根部生根3-12条时，得生根苗，备用；

S6.炼苗移栽：取步骤S5中得到的生根苗，移至温度为25-28℃、空气相对温度为70-80％、光照强度为2000-2600Lx、通风良好的环境下先开1/4-1/3瓶盖，适应0.5-1天后打开1/2-2/3瓶盖，0.5-1.5天后全开瓶盖，继续炼苗1-3天；然后取出组培苗洗净培养基，移栽至苗床中栽种，在苗床中种植一段时间后，可进行移栽种植，得娃儿藤移栽苗。

优化的方案，所述次氯酸钠溶液中还含有质量百分比浓度为0.05-0.09％的伊曲康唑和0.04-0.08％红霉素。

进一步优化的方案，S5步骤中培养生根时间为7-25天。

再进一步优化的方案，所述苗床由腐殖土、岩石、海藻肥、草木灰、甘蔗渣按照质量比为3：1：0.5：0.4：1组成。

再进一步优化的方案，苗床所处的环境为移至温度为25-28℃、空气相对温度为70-80％、光照强度为2000-2600Lx。