[发明专利]一种检测单碱基突变的方法

权利要求书

1.一种非疾病诊断的检测单碱基突变的方法，其包括以下步骤：

S1，根据目标基因设计荧光信号探针；所述荧光信号探针与目标基因的突变型基因完全互补，与目标基因的野生型基因形成单碱基错配；

S2，在含荧光信号探针的溶液中加入目标基因的待测样本和λ核酸外切酶，形成反应体系；

S3，获取反应体系在反应过程中的实时荧光曲线，判断目标基因的待测样本中是否存在单碱基突变；若获取的实时荧光曲线随时间变化呈上升趋势或随时间变化先呈上升趋势然后趋于平稳，则目标基因的待检样本中存在单碱基突变；若获取的实时荧光曲线随时间变化一直趋于平稳，则目标基因的待检样本中不存在单碱基突变；

所述荧光信号探针与目标基因的野生型基因形成的单碱基错配位置位于荧光信号探针5’端的第4位点；所述荧光信号探针与目标基因互补的碱基个数为12个；

所述单碱基突变为碱基G突变为碱基A；

所述步骤S2具体包括：在含荧光信号探针的溶液中加入5μL目标基因的待测样本，然后加入0.5mol/L的5μL氯化钠溶液，并用无酶水将体积补充至48μL，最后加入2μL的λ核酸外切酶到管壁上，盖好盖子，用离心机涡旋混匀，形成反应体系；

步骤S2中形成的反应体系中，荧光信号探针的浓度为80-100nM；目标基因的待测样本的浓度与荧光信号探针的浓度之比为1:(1-1.2)；λ核酸外切酶的浓度为20-30nM；

步骤S3中，用酶标仪获取反应体系在反应过程中的实时荧光曲线，酶标仪程序每8s一个循环监测，总共270个循环；反应过程中的反应温度为35-40℃，反应时间为10-20min；

所述荧光信号探针上带有荧光基团、荧光淬灭基团和5’端磷酸标记；

所述荧光信号探针的序列为5’-3’:P-TCT-FAM-CCACAGTCAAA-BHQ1；

所述方法对单碱基突变的检测限为0.1％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中形成的反应体系中，λ核酸外切酶的浓度为25-28nM。