[发明专利]一种Wright-Giemsa染色试剂及其使用方法

说明书

本发明提供了一种Wright‑Giemsa染色试剂及其使用方法，该技术方案首先从配制方法角度对染色试剂进行了表征，该配制方法简单方便，可以较短时间完成，所得染色剂在特定的保存环境下具有较长的有效期。在此基础上，本发明围绕其对生物检材涂片的染色方法进行了全新设计，该方法先有0.25mL的染色剂对涂片染色30s，而后再滴加1mL磷酸缓冲液继续保持20min，最后经清水洗净后晾干即完成染色。本发明染色剂配制简单、染色时间短、效果优良、各类细胞容易鉴别，主要适用于骨髓液细胞、外周血细胞、胸腹水细胞及脑脊液细胞等标本涂片的染色检查。

技术领域

本发明涉及生物学试剂技术领域，进一步涉及生物材料染色剂的配制与应用，具体涉及一种Wright-Giemsa染色试剂及其使用方法。

背景技术

由于当下市售试剂染色效果欠佳，从而可能导致对细胞分类或判读出现失误，因此对其配方及染色时间做出相应调整。Wright染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成，对细胞质成分及中性颗粒等染色效果良好，但Wright染料对细胞核染色不如Giemsa染料。Giemsa染料由天青和伊红组成，对细胞核染色效果良好。甲醇的作用一方面可以使伊红解离为离子状态的E-，使亚甲蓝解离为离子状态的M+；另一方面可以起到固定细胞的作用。Wright-Giemsa染液对细胞染色既有物理吸附又有化学亲和作用，细胞内多种成分属于蛋白质类及核酸类物质，均为两性电解质，所带电荷随着溶液的PH值而定，磷酸盐缓冲液用来调节细胞着色所必须的PH值，只有在最合适的PH条件下才能染出最为理想的观察效果。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种Wright-Giemsa染色试剂及其使用方法，以解决现有技术中用于髓液细胞、外周血细胞、胸腹水细胞、脑脊液细胞等标本涂片的染色剂染色效果不佳的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术中相关染色剂在使用时所需的染色时间较长。

本发明要解决的再一技术问题是现有技术中相关染色剂的配制方法繁琐。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种Wright-Giemsa染色试剂，该染色试剂是通过以下方法制备的：

1)以重量比为5:1的比例将Wright染料和Giemsa染料混合，以Wright染料与甲醇用量比为1:500(g:mL)的比例取甲醇待用；

2)在研钵内将Wright染料和Giemsa染料的混合物研磨至粉状；

3)取甲醇总体积的1/10加入至粉状物中继续研磨20min，将已溶解的染液倒入棕色试剂瓶内，得到未溶解的固形物；

4)重复步骤3)直至固形物全部溶解，将余量的甲醇全部加入至棕色试剂瓶内；

5)室温条件下密封避光保存1个月。

作为优选，所述Wright-Giemsa染色试剂的有效期为5年。

一种上述Wright-Giemsa染色试剂的使用方法，包括以下步骤：向生物检材的涂片上滴加0.25mL所述Wright-Giemsa染液，30s后滴加磷酸盐缓冲液工作液1mL，吹动混匀，20min后用流动水冲洗涂片，晾干。

作为优选，所述生物检材是骨髓液细胞、外周血细胞、胸腹水细胞或脑脊液细胞。

作为优选，该染色方法中，涂片是位于染片架上完成的。

作为优选，所述吹动混匀是用洗耳球完成的。