[发明专利]一种海马原代细胞培养体系的建立方法有效
| 申请号： | 201711050527.5 | 申请日： | 2017-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN107858322B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 林强;张博;秦耿;张艳红;张辉贤;李春燕 | 申请（专利权）人： | 中国科学院南海海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;胡素丽 |
| 地址： | 511458 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海马 细胞培养 体系 建立 方法 | ||
1.一种海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：用无菌海水浸泡活体海马20min，用无菌纱布吸干海马表面液体，再将海马置于体积分数75％酒精中浸泡1-2min，无菌海水漂洗海马2-3次，于无菌条件下取出胚胎或肝脏，胚胎或肝脏经漂洗培养液漂洗后用胰蛋白酶消化，过滤除杂，离心，去掉上清液，细胞沉淀用原代生长培养液重悬，制得单细胞悬液，将单细胞悬液移入添加有原代生长培养液的培养瓶中培养，每2-3天按半量换液方式更换原代生长培养液；所述的漂洗培养液为：以DMEM/F12培养基为基础培养基，所述的基础培养基中还添加有青霉素和链霉素；所述的原代生长培养液为：以DMEM/F12培养基为基础培养基，添加体积分数20％FBS、青霉素、链霉素、1-5ng/mL FGF和2-10ng/mLEGF。
2.根据权利要求1所述的海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，所述的胚胎或肝脏经漂洗培养液漂洗后用胰蛋白酶消化，其消化时间为10-20min。
3.根据权利要求1所述的海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，所述的原代生长培养液为：以含体积分数20％FBS的DMEM/F12培养基为基础培养基，所述的基础培养基中还添加有400IU/mL青霉素、400μg/mL链霉素、5ng/mL FGF和2ng/mL EGF。
4.根据权利要求1～3任一项所述的海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，所述的海马为线纹海马(Hippocampus erectus)。
5.一种海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：用无菌海水浸泡活体海马20min，用无菌纱布吸干海马表面液体，再将海马置于体积分数75％酒精中浸泡1-2min，无菌海水漂洗海马2-3次，于无菌条件下取出育儿袋，育儿袋用漂洗培养液漂洗，然后将育儿袋切块后接种于培养瓶中，干贴培养后，加入原代生长培养液培养，每2-3天按半量换液方式更换原代生长培养液；所述的漂洗培养液为：以DMEM/F12培养基为基础培养基，所述的基础培养基中还添加有青霉素和链霉素；所述的原代生长培养液为：以DMEM/F12培养基为基础培养基，添加体积分数20％FBS、青霉素、链霉素、1-5ng/mL FGF和2-10ng/mLEGF。
6.根据权利要求5所述的海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，所述的原代生长培养液为：以含体积分数20％FBS的DMEM/F12培养基为基础培养基，所述的基础培养基中还添加有400IU/mL青霉素、400μg/mL链霉素、5ng/mL FGF和2ng/mL EGF。
7.根据权利要求5或6所述的海马原代细胞培养体系的建立方法，其特征在于，所述的海马为线纹海马(Hippocampus erectus)。
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