[发明专利]微生物发酵生产谷内酯的方法、工程菌及应用

权利要求书

1.一种通过微生物发酵生产谷内酯的方法，包括利用谷内酯生产菌由甾醇发酵生产谷内酯，其特征在于，所述谷内酯生产菌具有至少一种脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶，该酶能够催化以下化合物I至II的反应i，并且所述方法包括抑制所述谷内酯生产菌中的至少一种所述脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶的活性和/或表达量，所述反应为：

其中，“—X”为羟基或羰基；“—Y”为羟基或“—SCoA”；

其中所述谷内酯生产菌包括红球菌(Rhodococcus)、诺卡式菌(Nocardia)、分枝杆菌(Mycobacterium)、链霉菌(streptomyces)和节杆菌(Arthrobacter)和假单胞菌(Pseudomonas)；

其中所述脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、4、13或14所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抑制通过基因敲除或基因突变来实现。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述发酵生产在25-45℃、7-8的pH下进行3-12天。

4.一种谷内酯生产工程菌，其特征在于，所述谷内酯生产工程菌中的至少一种脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶的活性和/或表达量被抑制，其中所述脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶能够催化以下化合物I至II的反应i：

其中，“—X”为羟基或羰基；“—Y”为羟基或“—SCoA”；

其中所述谷内酯生产菌包括红球菌(Rhodococcus)、诺卡式菌(Nocardia)、分枝杆菌(Mycobacterium)、链霉菌(streptomyces)和节杆菌(Arthrobacter)和假单胞菌(Pseudomonas)；

其中所述脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、4、13或14所示。

5.根据权利要求4所述的谷内酯生产工程菌，其中所述抑制是通过基因敲除或基因突变来实现的。

6.根据权利要求4或5所述的谷内酯生产工程菌在发酵生产谷内酯中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其中所述发酵生产在25-45℃、7-8的pH下进行3-12天。

8.脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶用于催化以下化合物I至II的反应i的应用：

其中，“—X”为羟基或羰基；“—Y”为羟基或“—SCoA”；其中所述脂肪酸辅酶A/羧酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、4、13或14所示。

9.根据权利要求8所述的应用，其中所述催化在pH 7-10、25-45℃下进行。