[发明专利]一种扩增布莱凯特黑牛UCK2基因的引物及筛选布莱凯特黑牛优质牛种的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，其特征是：选择布莱凯特黑牛UCK2基因mRNA表达水平高的布莱凯特黑牛牛种为优质牛种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：在以GAPDH为内参基因的荧光定量PCR检测方法中，选择UCK2基因mRNA表达水平大于等于5的布莱凯特黑牛牛种为优质牛种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是：UCK2基因mRNA表达水平检测方法包括以下步骤：

（1）取布莱凯特黑牛待检样本，提取待检样本的RNA，然后将RNA反转录成cDNA，作为实时荧光定量PCR扩增的模板；

（2）采用实时荧光定量PCR扩增布莱凯特黑牛的UCK2基因，得PCR产物，扩增所用的引物如下：

上游引物：5’ AAGGGATCCTGGCCTTCTA 3’

下游引物：5’ TTCGCTGATGTCCCTTAATACTC 3’；

（3）采用实时荧光定量 PCR 仪定量分析UCK2基因mRNA的表达水平，以GAPDH为内参基因，采用 2-ΔΔCt 法计算分析。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤（1）中，所述待检样本为布莱凯特黑牛的组织样本或血液样本。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤（2）中，实时荧光定量PCR的反应体系为：荧光染料10ul、上下游引物各0.5ul、cDNA 1ul、双蒸水8ul，共20 uL。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤（2）中，实时荧光定量PCR的反应条件为：94℃预变性10 min；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s，40个循环。