[发明专利]一种人纤维蛋白溶解酶的制备方法

权利要求书

1.一种纤维蛋白溶解酶的制备方法，其步骤为：

(1)取人血浆提取的纤维蛋白溶解酶原，过滤器过滤；

(2)稀释：缓冲液稀释步骤(1)中所得的溶液至纤维蛋白溶解酶原至特定蛋白浓度为2.0～3.0mg/ml，调节pH值；

(3)激活：将尿激酶与步骤(2)中溶液混匀，然后置于23～28℃循环水孵育5～120min；

(4)终止：在步骤(3)反应混合物中添加终止剂混匀；

(5)纯化分离；

其中，

步骤(1)中，

所述的人纤维蛋白溶解酶原为新鲜制备的人纤维蛋白溶解酶原，或融化的冻存的人纤维蛋白溶解酶原；

所述的融化为：使用25～35℃循环水融化所述纤维蛋白溶解酶原；

所述的过滤器孔径为1.0μm、0.2μm、0.45μm；

步骤(2)中，

所述缓冲液为：浓度为20mmol/L的Tris-HCl缓冲液，不含NaCl；

所述调节pH值的方法为，使用0.5mol/L的Tris溶液调节稀释液pH值至7.5～9.0；

步骤(3)中，

所述尿激酶终浓度为：1.4～6.0μg/ml；

步骤(4)中，

所述的终止剂为ε-氨基己酸，所述的终止剂的使用终浓度为0.5～1.0mol/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(2)中，所述缓冲液为：pH值为7.5的浓度为20mmol/L的Tris-HCl缓冲液，不含NaCl；

步骤(3)中，所述尿激酶终浓度为：1.8μg/ml；所述的孵育温度为25℃；所述的孵育时间为15～30min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

步骤(5)纯化分离为：

去除纤维蛋白溶解酶中的尿激酶，所述的去除纤维蛋白溶解酶中的尿激酶方法为，用离子交换层析法将Plm与UK分离；所述的离子交换层析法为阳离子交换层析，在pH 7.5条件下纯化分离纤维蛋白溶解酶与尿激酶。