[发明专利]玉叶金花的多成分含量测定方法

权利要求书

1.玉叶金花的多成分含量测定方法，其特征在于，所述方法包括以下内容：

（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0 .1%磷酸为流动相B，进行梯度洗脱，时间为90分钟，洗脱过程：0～15min，7%A；15～50min，19%A；50～80min，19%A；80～90min，90%A；进样量10 μL，柱温35 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长为254nm；

（2）提取样品：取过四号筛的本品粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20mL，称定重量，超声处理30 min，超声条件为：功率320W、频率40kHz，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得；

（3）制备新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯9种对照品储备液；

（4）用上述9种对照品储备液制备4种不同线性浓度的混合对照品溶液；

（5）线性考察：将上述9种对照品储备液按上述色谱条件进样10μL、4种对照品混合溶液分别进样10μL，分别作为线性浓度从高到低的5个点，以对照品的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；

（6）精密度试验：取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次；

（7）重现性试验：取同一批供试品粉末约0 .5 g，精密称定，按上述的提取方法提取并平行测定6份；

（8）准确度试验：取同一批供试品粉末约0 .25 g，精密称定，共12份，按精密度结果计算出来的9种成分的含量分别加入三个水平50%、100%、150%的对照品量，按上述提取方法提取并平行测定；

（9）耐用性试验：分别采用不同品牌的色谱柱测定同种样品中6种有机酸类成分的含量；

（10）检测限与定量限：当信噪比为3时，测得新绿原酸、山栀苷甲酯、绿原酸、隐绿原酸、玉叶金花苷酸甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的检测限分别为1.165、1.787、0.973、1.088、1.265、1.538、0.945、0.994和1.315ng；当信噪比为10时，测得新绿原酸、山栀苷甲酯、绿原酸、隐绿原酸、玉叶金花苷酸甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的定量限分别为3.882、5.956、3.243、3.628、4.216、5.128、3.149、3.312和4.383ng；

（11）玉叶金花样品含量测定结果：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定玉叶金花样品中9种成分的含量。