[发明专利]玉叶金花的多成分含量测定方法

说明书

本发明公开了一种玉叶金花的多成分含量测定方法，采用HPLC、LC‑MS对玉叶金花进行检测，建立了同时测定玉叶金花中新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,4‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、4,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、山栀苷甲酯、8‑O‑乙酰山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯9种化学成分的方法，该法通过了方法学验证，完善了玉叶金花的质量检测标准，为玉叶金花质量标准的建立奠定了基础。

技术领域

本发明涉及中医药检测技术领域，具体是玉叶金花的多成分含量测定方法。

背景技术

玉叶金花中含有有机酸类成分（新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸）及环烯醚萜苷类成分（山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯），还有较多的皂苷类成分（如玉叶金花皂苷R、V、M、Q、G、U、O）。其中有机酸类成分、环烯醚萜苷类成分为玉叶金花的主要有效成分。

玉叶金花药材为茜草科植物玉叶金花Mussaenda pubescens Ait. f.的干燥根和茎。全年可采，洗净，切段，干燥。具有清热解暑、凉血解毒的功效，在岭南地区广泛使用，主要用于治疗感冒、中暑、肾炎水肿、咽喉肿痛、支气管炎等病症，在国内清火消炎类药的知名品牌玉叶解毒颗粒、玉叶清火片中玉叶金花均作为君药使用。玉叶金花收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》第一卷，标准中只有理化鉴别，其他成药中也仅见薄层鉴别，尚未见关于其含量测定的相关报道。

发明内容

基于此，本发明采用HPLC、LC-MS对玉叶金花进行检测，建立了同时测定玉叶金花中新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯9种化学成分的方法，该法通过了方法学验证，完善了玉叶金花的质量检测标准，为玉叶金花质量标准的建立奠定了基础。

为实现上述技术目的，具体内容如下：

（1）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按表1进行梯度洗脱；进样量10 μL，柱温35℃，流速1.0 mL/min，检测波长为254nm；

表1 玉叶金花梯度洗脱表

（2）提取样品：取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，称定重量，超声处理（功率320 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得；

（3）制备新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯9种对照品储备液；

（4）用上述9种对照品储备液制备4种不同线性浓度的混合对照品溶液；

（5）线性考察：将上述9种对照品储备液按上述色谱条件进样10 μL、4种对照品混合溶液分别进样10 μL，分别作为线性浓度从高到低的5个点，以对照品的进样量（ng）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；