[发明专利]利用胸腹水组织提取DNA的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)胸腹水前处理：无菌条件下抽取胸腹水组织样本，加入抗凝剂混匀，离心得到胸腹水沉淀，然后加入缓冲液，混匀得到混合溶液；

2)细胞裂解：向步骤1)中的混合溶液中加入蛋白酶和裂解液，混匀后置于进行温育至细胞组织消化完全；

3)加入结合液，混匀后进行温育，然后加入异丙醇混匀；

4)磁珠吸附和分离：加入磁珠混匀，孵育，然后将孵育好的溶液置于磁性分离装置上，进行磁性分离；

5)蛋白去除：向步骤4)中加入去蛋白液，混匀后去除蛋白；

6)核酸从磁珠上释放：加入洗脱液，混匀后，然后吸取上清，得到胸腹水组织DNA。

2.根据权利要求1所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中所述的胸腹水组织样本为人胸腹水样本；

任选地，步骤1)中的抗凝剂为EDTA抗凝剂。

3.根据权利要求1或2所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤2)中所述蛋白酶为蛋白酶K，蛋白酶K的浓度为10～30mg/mL；

所述裂解液包括如下组分：8～20mmol/L的pH值为7～8的Tris-HCl缓冲液，300～500mmol/L的盐，1～3mmol/L的EDTA-2Na，和0.5～1.5mmol/L的盐酸胍。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤3)中所述结合液包括如下组分：2～8mmol/L的异硫氰酸胍、5～15mM pH4.4Tris-HCl缓冲液、5～15mM的尿素和质量体积比(g/mL)为10％～30％的Triton-X 100。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤4)中，所述磁珠的核心为四氧化三铁，外周包裹二氧化硅材料。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤5)中，所述去蛋白液包括如下组分：3～8mM pH6～7的Tris-HCl缓冲液、1～3mmol/L的盐酸胍和无水乙醇。

7.根据权利要求1所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，步骤6)中，所述洗脱液为：3～8mM的pH6.8～7.5的Tris-HCl缓冲液。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，在步骤5)去除蛋白后，加入漂洗液，混匀静置，待液体澄清后弃去上清；重复一到三次。

9.根据权利要求8所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法，其特征在于，所述漂洗液包括如下组分：30～80mM的盐、3～8mM pH6～7的Tris-HCl缓冲液和无水乙醇。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒依照权利要求1-9中所述的利用胸腹水组织提取DNA的方法制备而成。