[发明专利]利用胸腹水组织提取DNA的方法及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用胸腹水组织提取DNA的方法及试剂盒。本发明提供了利用胸腹水组织提取DNA的方法，包括如下步骤：胸腹水前处理、细胞裂解、核酸吸附和磁性分离、蛋白去除以及核酸从磁珠上释放的过程。本发明还提供了依据以上方法制备得到的试剂盒。采用本发明的方法和试剂盒能高效、快速地获得高质量DNA，可以满足PCR扩增、定量和定性分析、测序等分子生物学实验的要求，对诊断胸腹水产生的相关疾病具有应用价值，为胸腹水组织中DNA的制备提供了新的思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用胸腹水组织提取DNA的方法及试剂盒。

背景技术

胸腹水是局限性水肿的一种，是过多的液体在胸腹腔内积聚。胸腹水的产生机制较复杂，与体内外液体交换失衡及血管内外液体交换失衡有关。多种恶性肿瘤均可出现胸腹水，在肿瘤基础上出现的胸腹水称为恶性胸腹水。所以胸腹水也常作为疾病诊断的组织材料来源之一。

胸腹水中成分比较复杂，利用人体的胸腹水组织中提取高质量的DNA，是常规分子生物学研究及临床相关检测的前提，现行的DNA提取方法中并没有一种专门针对利用胸腹水中提取DNA的，且无法大体积批量操作，所以导致提取效率低下，提取出的DNA量、纯度均达不到实验分析的要求。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种适用于胸腹水组织中提取DNA的方法，提高DNA的提取效率和提取纯度。

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种利用胸腹水组织中提取DNA的方法，本发明提供的方法能够提高得率和纯度，且操作简单，时间短。

本发明是通过以下技术方案实现的：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种利用胸腹水组织中提取DNA的方法，包括如下步骤：

1)胸腹水前处理：无菌条件下抽取胸腹水组织样本，加入抗凝剂混匀，离心得到胸腹水沉淀，然后加入缓冲液，混匀；

2)细胞裂解：向步骤1)中的混合溶液中加入蛋白酶和裂解液，混匀后置于进行温育至细胞组织消化完全；

3)加入结合液，混匀后进行温育，然后加入异丙醇混匀；

4)磁珠吸附和分离：加入磁珠混匀，孵育，然后将孵育好的溶液置于磁性分离装置上，进行磁性分离；

5)蛋白去除：将步骤4)中加入去蛋白液，混匀后去除蛋白；

6)核酸从磁珠上释放：加入洗脱液，混匀后，然后吸取上清，得到胸腹水组织DNA。

按照如上实施例记载的步骤，将抽取的胸腹水组织样本进行离心处理，可以去除抽取到的胸腹水，获得胸腹水组织，然后加入蛋白酶和裂解液对组织中的细胞进行裂解，利用磁珠吸附核酸，利用去蛋白液去除蛋白，最后利用洗脱液使得核酸利用磁珠上释放出来。采用本发明实施例记载的方法，可以有效去除蛋白溶液，而且采用磁珠吸附，核酸的吸附效率高，不会掺杂其他杂质。采用本发明实施例记载的方法，能够提高得率和纯度，且操作简单，时间短。另外根据本发明的上述实施例的利用胸腹水组织提取DNA的方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述的胸腹水组织样本为动物胸腹水样本。需要说明的是，在本发明中所使用的表达方式中“动物”所指的动物种类不受特别限制。根据本发明的实施例，该动物可以为任何具有胸腹水组织的动物，优选为哺乳动物，更优选为大鼠、小鼠、人，最优选为人。

根据本发明的实施例，步骤1)中的抗凝剂为EDTA抗凝剂。EDTA抗凝剂能够与血液中钙离子结合成螯合物，凝血过程被阻断，使得血液不能发生凝固，对于组织样本的不利影响很小，提高DNA的提取效率。