[发明专利]里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合在调制优质苜蓿青贮饲料中的应用有效

专利信息
申请号: 201711061476.6 申请日: 2017-11-02
公开(公告)号: CN107988127B 公开(公告)日: 2021-09-03
发明(设计)人: 刘秦华;董志浩;邵涛;李君风;夏春雨;吴晓娟 申请(专利权)人: 南京农业大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/74;A23K10/30;A23K10/37;A23K10/12;C12R1/46
代理公司: 南京天华专利代理有限责任公司 32218 代理人: 徐冬涛;李晓峰
地址: 211225 江苏省南京市溧*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 里氏 木质 纤维素酶 基因工程 乳酸菌 组合 调制 优质 苜蓿 青贮饲料 中的 应用
【权利要求书】:

1.里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合在调制青贮饲料中的应用,其特征在于:所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合由能够分泌表达里氏木霉内切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌、能够分泌表达里氏木霉外切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌和能够分泌表达里氏木霉β-葡聚糖苷酶的转基因工程乳酸乳球菌组成;

所述的能够分泌表达里氏木霉内切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-egl3亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述的能够分泌表达里氏木霉外切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-cbh2亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述的能够分泌表达里氏木霉β-葡聚糖苷酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-bgl1亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述融合基因usp45-egl3的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示;所述的融合基因usp45-cbh2的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示;所述融合基因usp45-bgl1的核苷酸序列如SEQ IDNo. 3所示;

所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合中三种转基因重组乳酸乳球菌的用量比为1:1:1;将所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合按照每千克≥1×109CFU的添加量添加到鲜原料草中,无氧青贮50~70天;所述的鲜原料草为苜蓿、全株水稻、小麦秸秆、大黍和玉米秸秆中的任意一种。

2.一种提高青贮饲料发酵和营养品质的方法,其特征在于:将里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合添加到鲜原料草中进行无氧青贮;

所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合由能够分泌表达里氏木霉内切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌、能够分泌表达里氏木霉外切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌和能够分泌表达里氏木霉β-葡聚糖苷酶的转基因工程乳酸乳球菌组成;

所述的能够分泌表达里氏木霉内切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-egl3亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述的能够分泌表达里氏木霉外切葡聚糖酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-cbh2亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述的能够分泌表达里氏木霉β-葡聚糖苷酶的转基因工程乳酸乳球菌是将融合基因usp45-bgl1亚克隆至pMG36e原核表达载体中构建出重组表达载体,再将所述的重组表达载体转化乳酸乳球菌构建得到的;

所述融合基因usp45-egl3的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示;所述融合基因usp45-cbh2的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示;所述融合基因usp45-bgl1的核苷酸序列如SEQ IDNo. 3所示;

所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合中三种转基因重组乳酸乳球菌的用量比为1:1:1;所述的里氏木霉木质纤维素酶基因工程乳酸菌组合在鲜原料草中的添加量为每千克≥1×109CFU;所述无氧青贮的时间为50~70天;所述的鲜原料草为苜蓿、全株水稻、小麦秸秆、大黍和玉米秸秆中的任意一种。

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