[发明专利]一种二苯醚类化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种二苯醚类化合物的制备方法，其特征在于所述二苯醚类化合物是以福士拟茎点霉（Phomopsis fukushii）菌株经发酵、提取、层析、纯化后得到，其分子式为C₁₈H₂₀O₅，结构式为：

该化合物命名为：diphentherB；所述福士拟茎点霉（Phomopsis fukushii）菌株，菌株保藏编号为CCTCC M 2017632，保藏日期为2017年10月23日；制备方法包括以下步骤：

A、固体发酵：将菌株福士拟茎点霉（Phomopsis fukushii）在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中于28℃培养7天，接种到含10~100mL液体种子培养基的50~500mL的三角瓶中，于28℃下在转速180rpm旋转震荡的条件下震荡培养5~10天得到含菌营养基，将其接种到大米固体培养基中培养得到发酵产物；

B、浸膏提取：将发酵产物中加入固液体积比1.5~3倍的有机溶剂超声提取2~4次，每次4~8h，合并提取液，过滤，减压浓缩至1/4~1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩得到浸膏；

C、氯仿-丙酮硅胶柱层析：浸膏上硅胶柱层析，装柱硅胶为200~300目，用量为浸膏重量6~8倍量；用体积比为1:0~0:1的氯仿和/或丙酮溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

D、石油醚-乙酸乙酯硅胶柱层析：将C步骤中8:2配比的氯仿-丙酮混合溶液进行洗脱得到的洗脱液上硅胶柱层析，装柱硅胶为200~300目，用量为洗脱液重量6~8倍，用体积比为1:0~0:1的石油醚和/或乙酸乙酯溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离纯化：将D步骤中7:3配比的石油醚-乙酸乙酯混合溶液进行洗脱得到的洗脱液以40~60%的甲醇为流动相，以规格为20mm×250mm、5μm的C₁₈制备柱为固定相，流速为20mL/min，紫外检测器检测波长为284nm，每次进样200μL，收集洗脱液，多次累加后蒸干，即diphentherB。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基为马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，pH值6.5，121℃，25min灭菌，冷却至60℃倒斜面制备得到。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述液体种子培养基为NaNO₃2g/L，K₂HPO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，KCL 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，葡萄糖20g/L，pH值6.5，装入250mL锥形瓶，100mL/瓶，121℃，25min灭菌得到。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于A步骤中所述大米固体培养基为大米100g，珍珠岩20g，蒸馏水100mL，装入600mL组培瓶，121℃，25min灭菌制备得到。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中所述有机溶剂为体积浓度60~80%的丙酮、乙醇或甲醇。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述浸膏在经硅胶柱层析前，还包括将浸膏用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，然后用浸膏重1~3倍的200~300目硅胶拌样。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中所述氯仿和/或丙酮溶液体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于D步骤中所述石油醚和/或乙酸乙酯溶液体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1。