[发明专利]一株降低三七根腐病发病率的内生真菌及其菌剂

说明书

本发明属于微生物技术领域，涉及一株降低三七根腐病发病率的内生真菌及其菌剂。该菌株(SYPF 7101)分离于2年生健康三七茎部，经过鉴定为枝孢菌Cladosporium tenuissimum，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14126。本发明还提供了含有该菌株的菌剂的制作方法，分为4个步骤，菌种制备，培养基制备，菌剂生产以及菌剂施用。本发明生产的微生物菌剂可显著降低三七根腐病的发生率，显示出良好的生态应用前景。

技术领域：

本发明属于微生物技术领域，涉及一株降低三七根腐病发病率的枝孢属内生真菌(Cladosporium tenuissimum)，还涉及包含该真菌的菌剂的制备。

背景技术：

三七根腐病是三七生长过程中的最主要病害，每年因根腐病危害减产约10％～20％，严重的达70％以上，根腐病已成为影响三七产量的重要因素。三七根腐病是由病原微生物侵染引起的，包括真菌类病原物Cylindrocarpon destructans、Cylindrocarpondidynum、Fusarium solani、Fusarium oxysporum、Fusarium moniliformVar.intermeclium、Phytophthora cactorum、Phoma herbarum、Alternaria panax、Alternaria tenuis和Rhizoctonia solani等(三七根腐病病原研究，中国农业科学，2006，39(7)：1371-1378；三七根腐病原菌(Cylindrocarpon spp.)生物学特性研究，云南大学学报：自然科学版，2006，(S1)：342-346)和细菌类病原物Pseudomonas sp.等(三七根腐病复合侵染中病原细菌的研究，云南农业大学学报，1999,14(2)：123-127)。由于病原菌种类繁多给防治带来困难。

三七根腐病主要是通过药剂防治，农药使用会给三七带来农药残留和重金属污染等危害，因此合理降低农药使用，开发生物源菌剂对防治三七根腐病有重要作用。中国发明专利(申请号：CN200410079548.6)中公开了一株能够防治三七根腐病的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)生物菌剂制备方法，包括微生物的种子培养以及粉剂、颗粒剂和可湿性粉剂等剂型的制备。中国发明专利(申请号：CN201310020577.4)中公开了一种能够预防三七根腐病的多种混合生物菌剂制备方法，包括微生物的发酵、固体菌剂的制备。然而，目前三七根腐病依然是生产上面临的最主要的问题之一，加强根腐病防治是重中之重。植物内生菌是一类具有重要价值的微生物资源，开发来源于植物内生菌的菌剂更加安全。

发明内容：

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了从健康三七茎中分离出一株内生真菌(SYPF 7101)枝孢菌(Cladosporium tenuissimum)，将其用于三七根腐病的防治。该菌株来源于三七内生真菌，不会对三七产生致病作用，是一种安全的三七根腐病生防菌剂。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的内生真菌(SYPF 7101)枝孢菌(Cladosporium tenuissimum)通过如下方法获得：

从云南省文山县苗乡种植基地采集健康的2年生三七植株，超声清洗，澄清后用无菌水清洗，控干。

植物表面消毒程序：0.1-0.5％Tween 20浸泡→无菌水清洗→无菌2.5-5.0％硫代硫酸钠溶液处理→无菌水清洗→无菌75％乙醇处理→无菌水清洗。经表面消毒后的样品置于无菌的培养皿中，无菌干燥。

样品粉碎：将表面消毒的样品放入无菌搅拌器内充分打碎，放入无菌平皿中，干燥，然后挑取样品并分撒在分离平板上。培养观察，单菌落长出后转接到PDA培养基上培养，即获得了菌株SYPF 7101。

本发明的内生真菌通过鉴定确定为Cladosporium tenuissimum：