[发明专利]一种B群脑膜炎球菌重组嵌合蛋白疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种预防B群脑脊髓膜炎的重组嵌合蛋白疫苗制剂，其特征在于，所述疫苗制剂含有：P2-fHBP V1、P2-fHBP V2和P2-fHBP V3三种重组嵌合蛋白，其氨基酸序列分别为SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，其中每种蛋白含量分别为30-50μg/剂，所述疫苗制剂中还含有冻干保护剂或疫苗佐剂。

2.根据权利要求1所述的疫苗制剂，其特征在于，其中P2-fHBP V1、P2-fHBP V2和P2-fHBP V3三种重组嵌合蛋白的含量分别为35-45μg/剂，疫苗制剂的pH为5.8-7.2；疫苗制剂中含有佐剂铝佐剂或CpG佐剂，佐剂中的铝含量为0.4-0.6mg/ml；或佐剂中的CpG含量为120-180ug/ml。

3.根据权利要求1所述的疫苗制剂，其特征在于，为供皮下或肌肉注射的冻干或液体制剂。

4.根据权利要求3所述的疫苗制剂，其特征在于，为冻干剂型，采用乳糖、明胶、蔗糖或人血白蛋白制备成冻干制剂，以西林瓶分装冻干；稀释剂为无菌、无热原的注射用水、生理盐水或PBS，以预填充注射器或安瓿瓶分装。

5.根据权利要求3所述的疫苗制剂，其特征在于，为液体剂型，采用氢氧化铝、磷酸铝或其他铝佐剂制备成铝吸附液体疫苗，以西林瓶或预填充注射器分装；或采用CpG佐剂混合制备成液体疫苗，以预填充注射器分装。

6.权利要求1所述重组嵌合蛋白疫苗制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将P2-fHBP V1、P2-fHBP V2和P2-fHBP V3三个变异型重组嵌合蛋白，按比例稀释配制后，加入冻干保护剂或佐剂，采用冻干或吸附的方式配制成B群脑膜炎球菌蛋白疫苗制剂。

7.P2-fHBP V1重组嵌合蛋白，其特征在于，其制备方法经过以下步骤：

根据P2与fHBP V1的氨基酸序列及大肠杆菌密码子偏爱性，设计并合成全长DNA序列，将合成的目的基因片段p2-fhbp V1与质粒pET43.1a以T4 Ligase连接，连接产物转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，得到P2-fHBP V1/BL21(DE3)菌株，将菌种培养扩增得到菌体，经IPTG诱导表达，再经过蛋白提取、蛋白纯化得到重组嵌合蛋白P2-fHBP V1，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。

8.P2-fHBP V2重组嵌合蛋白，其特征在于，其制备方法经过以下步骤：

根据P2与fHBP V2的氨基酸序列及大肠杆菌密码子偏爱性，设计并合成全长DNA序列，将合成的目的基因片段p2-fhbp V2与质粒pET43.1a以T4 Ligase连接，连接产物转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，得到P2-fHBP V2/BL21(DE3)菌株，将菌种培养扩增得到菌体，经IPTG诱导表达，再经过蛋白提取、蛋白纯化得到重组嵌合蛋白P2-fHBP V2，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

9.P2-fHBP V3重组嵌合蛋白，其特征在于，其制备方法经过以下步骤：

根据P2与fHBP V3的氨基酸序列及大肠杆菌密码子偏爱性，设计并合成全长DNA序列，将合成的目的基因片段p2-fhbp V3和质粒pET43.1a以T4 Ligase连接，连接产物转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)，得到P2-fHBP V3/BL21(DE3)菌株，将菌种培养扩增得到菌体，经IPTG诱导表达，再经过蛋白提取、蛋白纯化得到重组嵌合蛋白P2-fHBP V3，其氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。

10.权利要求7,8,9任何一项重组嵌合蛋白，其特征在于，所述重组嵌合蛋白和破伤风类毒素的抗原表位P2或P30结合，或者和白喉类毒素的DT1或DT2表位结合。