[发明专利]一种B群脑膜炎球菌重组嵌合蛋白疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种B群脑膜炎球菌重组嵌合蛋白疫苗及其制备方法，所述疫苗含有：P2‑fHBP V1、P2‑fHBP V2和P2‑fHBP V3三种重组嵌合蛋白，其氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，其中每种蛋白含量分别为30‑50μg/剂，任选的，所述疫苗制剂中还含有冻干保护剂或疫苗佐剂；本发明还提供三种重组嵌合蛋白的制备方法，通过将P2与B群脑膜炎球菌fHBP蛋白连接形成的重组嵌合蛋白，能够有效的诱导体液免疫应答，显著提高fHBP的免疫原性，本发明的疫苗能够有效覆盖所有B群脑膜炎球菌菌株，从而对由B群脑膜炎球菌引起的脑脊髓膜炎、菌血症、肺炎及心包炎等侵袭性疾病提供广谱的预防作用。

技术领域

本发明涉及一种疫苗的制备，特别涉及一种B群脑膜炎球菌重组嵌合蛋白疫苗及其制备方法，所述B群脑膜炎球菌重组嵌合蛋白疫苗包括B群脑膜炎球菌人H因子结合蛋白(fHBP)与破伤风通用性T细胞表位P2连接形成的重组嵌合蛋白，该蛋白有三个变异型fHBPV1、fHBP V2和fHBP V3，将三种变异型重组嵌合蛋白按比例配制而成的疫苗制剂及其制备方法。

背景技术

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis，Nm)，俗称脑膜炎球菌(Meningococcus)，能够引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)和败血症，该疾病具有较高的发病率和病死率。脑膜炎奈瑟菌是一种以人类为主要宿主的致病性革兰阴性双球菌，曾数次引起全球范围的爆发与流行，其防控最佳策略为接种疫苗。

Nm的毒力因子主要包括荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)、脂寡糖和外膜蛋白(outer membrane protein，OMP)，其中OMP主要包括菌毛、孔蛋白(PorA和Por B)、黏附分子Opc等。Nm根据荚膜多糖结构分为A、B、C、H、K、L、X、Y、Z、29E和W135共12个血清群，A、B、C、Y及W135为侵袭性脑脊髓膜炎的常见血清群，其中A、B、C群脑膜炎球菌引起的病例占90％以上。

A、C、Y、W135群多糖疫苗和多糖-蛋白结合疫苗的应用，使得相应血清群流行性脑膜炎的发病率和病死率均得到有效控制。流脑流行的显著特征是具有明显的地域性，而且随着时间的推移和疫苗的应用，会发生血清群的转换。目前，B群脑膜炎奈瑟菌已经成为主要的流行菌株，据统计，B群脑膜炎奈瑟菌导致了全球约50％的脑膜炎疾病；且B群比A群、C群等持续时间更长，达5-10年。在B群流行期间，侵袭率会增加，并且年龄也会随之扩大，特别是4-19岁青少年人群。

然而B群Nm荚膜多糖中含有的线性多聚唾液酸与人N-乙酰神经氨酸聚合物结构类似，因此在人体内不具备免疫原性，并且有诱发自生免疫疾病的危险，所以多糖疫苗的策略并不适用于B群脑膜炎奈瑟菌。因此，B群脑膜炎球菌疫苗研发集中在有效的外膜蛋白抗原成份上，如H因子结合蛋白(factor H-binding protein，fHBP)、奈瑟菌属表面蛋白A(Neisseria surface protein A，NSPA)、奈瑟菌属黏附素A(Neisseria adhesin A，

NadA)、奈瑟菌属肝素结合抗原(Neisseria heparin binding antigen，NHBA)等。

fHBP是一种几乎表达于所有脑膜炎奈瑟菌表面的特异性脂蛋白，相对分子质量约29KD，是脑膜炎奈瑟菌重要的毒力因子和疫苗抗原。fHBP根据抗原交叉反应性和蛋白序列相似性被细分为3个变异型，即V1，V2和V3。变异型内氨基酸序列同源性在90％以上，变异型间可低至62.8％。杀菌力实验分析表明，抗变异型V1抗体对变异型V2，V3脑膜炎分离株杀菌活性交叉反应性很小，反之亦然。

fH(人H因子)是补体激活过程中的重要负调节蛋白，能辅助I因子介导C3b裂解为灭活片段iC3b，也能促使补体替代途径C3转化酶C3Bb的半衰期缩短。fHBP与fH结合，使fH覆盖于细菌表面，从而抑制补体系统的杀菌作用。研究发现fHBP可引发广泛的交叉反应，并且这些反应是非PorA依赖性杀菌反应，血清杀菌力实验也表明fHBP具有较强的免疫原性。