[发明专利]一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫试剂盒在审
申请号: | 201711074441.6 | 申请日: | 2017-11-05 |
公开(公告)号: | CN109752523A | 公开(公告)日: | 2019-05-14 |
发明(设计)人: | 杜道林;薛永来;杜霞 | 申请(专利权)人: | 江苏维赛科技生物发展有限公司 |
主分类号: | G01N33/533 | 分类号: | G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577 |
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地址: | 212009 江苏省镇*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 恩诺沙星 制备 荧光免疫分析试剂 种检测 时间分辨荧光免疫分析 时间分辨荧光免疫 恩诺沙星标准品 单克隆抗体 多孔包被板 抗体冻干品 羊抗鼠抗体 样品前处理 检测试剂 特异性强 现场操作 包被原 缓冲液 灵敏度 免疫原 前处理 试剂盒 洗涤液 增强液 铕标记 荧光 回收率 分辨 应用 | ||
1.一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒,其特征在于:由多孔包被板,缓冲液,恩诺沙星标准品,恩诺沙星的抗体冻干品,铕标记的羊抗鼠抗体,洗涤液和增强液所组成。
2.一种根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒,包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理,其特征在于:
(1) 将恩诺沙星与牛血清白蛋白偶联,得到免疫原;
(2) 将恩诺沙星与卵血清蛋白偶联,得到包被原;
(3) 用步骤(1)的免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术,得到分泌抗恩诺沙星的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;
(4) 以体内诱生腹水法大量制备抗体,使用Protein G柱进行纯化,获得抗恩诺沙星的单克隆抗体
(5) 用步骤(2)的包被原包被固相载体;
(6) 将动物组织先经过酸解提取后,再过MAX柱净化,最后加入衍生试剂和催化剂进行处理,得到待测产物;
(7) 将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps,对照标准曲线计算样品中的恩诺沙星恩诺沙星含量。
3.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的固相载体是多孔包被板,采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。
4.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的衍生试剂是丁胺。
5.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。
6.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述步骤(6)和(7)具体为取包被有恩诺沙星-OVA的微孔包被板,加入50 µL处理好的样品到各自的微孔中,加入50 µL以缓冲液稀释的恩诺沙星抗体,25~37℃振荡0.5~1小时,洗涤液洗三次,加以缓冲液稀释的100 µL Eu3+-羊抗鼠抗体,25~37℃振荡0.5~1小时,洗涤液洗六次,加200 µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps,从标准曲线计算样品中的恩诺沙星含量。
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