[发明专利]一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫试剂盒在审

专利信息
申请号: 201711074441.6 申请日: 2017-11-05
公开(公告)号: CN109752523A 公开(公告)日: 2019-05-14
发明(设计)人: 杜道林;薛永来;杜霞 申请(专利权)人: 江苏维赛科技生物发展有限公司
主分类号: G01N33/533 分类号: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 212009 江苏省镇*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 检测 恩诺沙星 制备 荧光免疫分析试剂 种检测 时间分辨荧光免疫分析 时间分辨荧光免疫 恩诺沙星标准品 单克隆抗体 多孔包被板 抗体冻干品 羊抗鼠抗体 样品前处理 检测试剂 特异性强 现场操作 包被原 缓冲液 灵敏度 免疫原 前处理 试剂盒 洗涤液 增强液 铕标记 荧光 回收率 分辨 应用
【权利要求书】:

1.一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒,其特征在于:由多孔包被板,缓冲液,恩诺沙星标准品,恩诺沙星的抗体冻干品,铕标记的羊抗鼠抗体,洗涤液和增强液所组成。

2.一种根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒,包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理,其特征在于:

(1) 将恩诺沙星与牛血清白蛋白偶联,得到免疫原;

(2) 将恩诺沙星与卵血清蛋白偶联,得到包被原;

(3) 用步骤(1)的免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术,得到分泌抗恩诺沙星的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;

(4) 以体内诱生腹水法大量制备抗体,使用Protein G柱进行纯化,获得抗恩诺沙星的单克隆抗体

(5) 用步骤(2)的包被原包被固相载体;

(6) 将动物组织先经过酸解提取后,再过MAX柱净化,最后加入衍生试剂和催化剂进行处理,得到待测产物;

(7) 将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps,对照标准曲线计算样品中的恩诺沙星恩诺沙星含量。

3.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的固相载体是多孔包被板,采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。

4.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的衍生试剂是丁胺。

5.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。

6.根据权利要求1所述检测恩诺沙星的时间荧光免疫分析法试剂盒,其特征在于:所述步骤(6)和(7)具体为取包被有恩诺沙星-OVA的微孔包被板,加入50 µL处理好的样品到各自的微孔中,加入50 µL以缓冲液稀释的恩诺沙星抗体,25~37℃振荡0.5~1小时,洗涤液洗三次,加以缓冲液稀释的100 µL Eu3+-羊抗鼠抗体,25~37℃振荡0.5~1小时,洗涤液洗六次,加200 µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps,从标准曲线计算样品中的恩诺沙星含量。

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