[发明专利]一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测恩诺沙星的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、恩诺沙星标准品、恩诺沙星的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测恩诺沙星的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

恩诺沙星是氟喹诺酮类抗生素，具有下列特性：由于独特的化学结构，使其成为兽医临床药物中十分重要的抗生素。恩诺沙星对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和支原体类病原菌均具有广谱抗菌活性，在一定的浓度下对细菌支原体也具有杀菌作用，还能杀死对抗生素具有抗药力的细菌，例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。恩诺沙星因其具有独特的作用，自80年代开始就被广泛的应用于动物和鱼虾类的疾病的预防和治疗。但最近的研究发现，凡使用过恩诺沙星的动物，在一定时期内其产品都有残留，因其具有神经毒性和肾脏毒性，所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响，欧美国家及我国均要求对其限量使用。2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100 µg /kg，在所有食品动物的肝、肾中最高残留限量为200 µg/kg。因此，恩诺沙星己经列为兽药残留监控的重点。检测恩诺沙星残留量的化学方法主要有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气一质联机(GC/MS)、液一质联机(HPLC/MS)、毛细管电泳(CE)等，由于复杂的仪器设各和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。

免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性，以及测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点，在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化，免疫学检测技术会成为食品农兽药残留和食品安全质量控制的有效快速检测手段。基于目前兽药残留诊断试剂的研究现状，及时开发出优于目前的、快速灵敏的检测试剂可谓是当务之急。虽然农兽药残留分析的方法虽然有很多，但是利用免疫学技术进行分析是特异性最好、检测时间最短的方法。

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对恩诺沙星检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中恩诺沙星残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中恩诺沙星残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、恩诺沙星标准品溶液、抗恩诺沙星的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测恩诺沙星的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1) 免疫原的制备：将半抗原恩诺沙星与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（恩诺沙星-BSA）；

(2) 包被原的制备：将半抗原恩诺沙星与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（恩诺沙星-OVA）；

(3) 单克隆抗体的制备：