[发明专利]一种识别HepG2细胞中Ag+的2‑芳基咪唑邻菲啰啉探针及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种能识别HepG2细胞中Ag⁺的2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉荧光探针及其制备方法，属于金属离子的荧光探针领域。

背景技术

银是人体组织内的微量元素之一，微量的银对人体是无害的。银离子由于具有独特的抗菌性能，以前它通常用来杀菌，它的化合物在电子和药物行业中都有广泛的应用。由于涉及银的药物及其他产品的开发越来越多，因此日常生活中我们接触银颗离子的机会也慢慢增加。研究表明，沉积于人体的少量银能对人体细胞产生毒副作用，如降低肝细胞中的超氧化物歧化酶和过氧化酶的细胞活性，减少还原型谷胱甘肽的浓度，产生肝毒性反应。另外，银离子会使含巯基的细菌失活，与胺、咪唑等各种代谢物结合从而导致各种疾病。因此，设计增强型的Ag⁺荧光探针去检测HepG2细胞中的银离子浓度具有重要的意义。

目前常用于活体细胞中检测Ag⁺的分析检测方法主要是利用Ag⁺和化学分子探针之间的特异性化学反应或超分子作用产生的信号变化来对Ag⁺进行分析检测，这些荧光探针分子对Ag⁺有高选择性以及较高的灵敏度。因此制备一种荧光探针分子用来检测HepG2细胞中的Ag⁺，使用高灵敏技术对其进行微量和快速检测，对于能够及早地发现肝器官的病变显得尤为重要。

本发明提供了一种能够识别HepG2细胞内Ag⁺的荧光探针2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉化合物及其制备方法。

发明内容

本发明的目的是一种能识别HepG2细胞中Ag⁺的2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉荧光探针及其制备方法。本发明提供的荧光探针对HepG2细胞内Ag⁺的识别结果准确，灵敏度高。

本发明提供的能够识别HepG2细胞内Ag⁺的2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉化合物的荧光探针，具有式(I)所示

其中R为2、3、4、5或6位取代的甲基、乙基、丙基、丁基、硝基、Cl、F、乙酰基，羟基，甲氧基。

本发明还提供了一种识别HepG2细胞中Ag⁺的2-芳基咪唑邻菲啰啉探针的制备方法。更详细地说是以1,10-菲啰啉为原料，合成出中间体1,10-菲啰啉-5,6-二酮，然后中间体与醛合成2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉化合物。

实现本发明的技术方案如下：

反应步骤如下：

（1）将1,10-菲啰啉、二氧化硒、浓硫酸、浓硝酸混合物加热回流后，反应结束后得到粗产物，经重结晶得到纯的化合物（Ⅱ），为黄色固体；

（2）将化合物（Ⅱ）与苯甲醛衍生物、醋酸铵、L-脯氨酸溶于乙醇中在室温下搅拌，反应一定时间后经柱层析得到化合物（I），为黄色针状晶体；

根据本发明，优选的，步骤（1）所述的1,10-菲啰啉、二氧化硒的的摩尔比为1:3；

根据本发明，优选的，步骤（2）所述的化合物（Ⅱ）1,10-菲罗啉-5,6-二酮、苯甲醛衍生物的摩尔比为1:1；

根据本发明，优选的，步骤（1）所述的反应温度为100-140℃，更优选为110-130℃；

根据本发明，优选的，步骤（2）所述的反应温度为20-40℃，更优选为25-30℃；

更为详细的，所述的能够识别HepG2细胞内Ag⁺的2-芳基咪唑并[5，6-f]邻菲啰啉荧光探针的制备方法，步骤如下：

（1）称取1,10-菲啰啉1.98g，二氧化硒3.3g，于烧瓶中混合均匀，将20mL浓硫酸，10 mL浓硝酸混合，冰水浴冷却形成冷却的混合酸。沿烧瓶壁缓慢滴加冷却的混合酸，滴加完毕，加热回流，瓶内逐渐生成红棕色气体。停止加热，得到红棕色透明溶液；把红棕色透明溶液倒入至冰水中，用NaOH缓慢中和酸，直到反应混合物的PH=7，此过程生成较多黄色絮状沉淀，抽滤得黄色沉淀，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，水洗两次，合并有机相，有机相旋转蒸干得黄色粉末为化合物（Ⅱ），甲醇重结晶烘干，产率92%。