[发明专利]单链环状文库的构建方法

权利要求书

1.单链环状文库的构建方法，包括：

1）利用转座酶复合体打断靶DNA，得到DNA打断产物；

所述转座酶复合体包括转座酶和转座元件，所述转座酶为TN5转座酶，所述转座元件由名称分别为A和B的接头组成；

所述A由名称分别为a1和c1的单链DNA组成，所述a1由捕获标签、名称序列甲的单链DNA和所述转座酶的识别序列依次连接得到，所述序列甲为序列表中序列1的第1-16位所示的单链DNA，所述识别序列为序列1的第17-35位；所述c1为所述识别序列的互补序列；

所述B由所述识别序列所示单链DNA以及所述c1组成；

2）对所述DNA打断产物进行缺口平移，得到缺口平移产物；将所述缺口平移产物解链，利用所述捕获标签进行捕获得到含有所述捕获标签的单链DNA；所述捕获标签为生物素；

利用成套引物对所述含有所述捕获标签的单链DNA进行扩增，得到的扩增产物；所述成套引物由名称分别为P1、P2和P3的单链DNA组成；

所述P1含有所述序列甲，所述序列甲位于所述P1的3′端，所述P1还含有标签序列和/或用于对所述标签序列进行测序的标签测序引物和/或测序引物；所述标签序列为随机序列，所述标签序列的长度为6-16nt ；

所述P2为所述P1的5′端的第1-15位；

所述P3为所述识别序列的3′端部分序列，所述P3的长度为6-19nt；

3）将所述扩增产物环化，得到单链环状文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述成套引物中所述P1、所述P2和所述P3的摩尔比为1:50:1-1:300:1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述成套引物中所述P1、所述P2和所述P3的摩尔比为1:100:1-1:200:1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1中所述标签序列的长度为10nt。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述标签测序引物为标签测序引物1和标签测序引物2；所述标签测序引物1为序列表中序列2的第18-32位所示的单链DNA，所述标签测序引物2为与序列表中序列2的第43-59位互补的单链DNA；

所述测序引物为测序引物1和测序引物2；所述测序引物1为序列表中序列2的第58-84位所示的单链DNA，所述测序引物2为与序列表中序列2的第1-25位互补的单链DNA。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述P1为序列表中序列2所示的单链DNA；

所述P2为序列表中序列3所示的单链DNA；

所述P3为序列表中序列4所示的单链DNA。

7.单链DNA前体文库的制备方法，包括权利要求1-6中任一所述方法中的步骤1）和2）。