[发明专利]一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物农业技术领域，涉及一种淡紫拟青霉菌剂的培养方法，具体涉及一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法。

背景技术

淡紫拟青霉作为一种生物防治菌剂，在防治蔬菜、水果花卉的根结线虫病和青枯病、黄枯萎病、根腐病等根部死棵病方面效果非常优秀。

市场销售上的淡紫拟青霉菌剂采用液体发酵培养和固体吸附烘干的生产方法，虽然生产菌剂的纯度和孢子含量很高，但是生产成本和销售价格以及每亩土地的防治成本也很高，致使淡紫拟青霉菌剂难以推广。

发明内容

本发明针对以上不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法。本发明可以实现以下发明目的：

本发明的生产方法简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高，杂菌少，脱落率低，稳定性高，在蔬菜和花卉方面的应用效果显著。

为解决上述技术问题，采用以下技术方案：

一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：菌体分离培养、一级种子平板培养、二级种子固体培养、稳定处理、三级种子固体培养、规模固体培养。

一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，其特征在于，所述一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法包括以下步骤：

1）菌体分离培养：用淡紫拟青霉菌株在PDA培养基上培养，并进行转管培养；

2）一级种子平板培养：向转管培养后的菌种管中加入含吐温80的无菌水，制成孢子悬浮液，吸取孢子悬浮液接到PDA平板培养基上在温箱里培养；

3）二级种子固体培养：将麸皮和玉米粉混合得料，水和料混合，灭菌；接种孢子悬浮液后培养，待料表面全部变白后，移入室温条件下继续培养；

4）稳定处理：将二级种子放入恒温箱，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，再升温至25℃；

5）三级种子固体培养：将二级种子菌种和水、料混合，连续培养 2-10天；

6）规模固体培养：所述的规模培养，包括培养料的准备、混合方法、平面培养和粉粹包装。

作为本发明优选的技术方案，所述稳定处理，将二级种子放入恒温箱，22℃保持45min后，以0.5-1℃的升温速率升温至28℃，恒温40min，然后以0.5-1℃的降温速率降温至-4℃，恒温15min，再以1.5-2℃的升温速率升温至25℃，保持恒温。

作为本发明优选的技术方案，其特征在于，所述二级种子固体培养，将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合得料，水和料按1：1-10比例混合，灭菌；接种孢子悬浮液，置于25℃温箱培养，待料表面全部变白后，3天翻料一次，移入室温条件下继续培养10d。

作为本发明优选的技术方案，所述三级种子固体培养，将麸皮和玉米粉按10-1:1的比例混合，二级种子淡紫拟青霉菌种和水、料按1：10-100:1-100的比例混合，然后将培养料铺在瓷盘上，在室温条件下培养，控制好温度，连续培养 2-10天，然后封闭阴干后粉粹，包装存放。

作为本发明优选的技术方案，所述三级种子固体培养，培养料铺在瓷盘上的厚度为1-10cm。

作为本发明优选的技术方案，所述平面培养，将混合后的培养料摊铺在平整的地面上，厚度为1-10cm，在18-28℃条件下进行发酵培养；1天后和培养基干燥结块，在培养基内布满白色菌丝后翻动一次，连续培养2-10天后，进行通风阴干。

作为本发明优选的技术方案，所得到的一种淡紫拟青霉菌剂，有效孢子量为2.0-2.2×10⁸cfu/g，杂菌率≤0.1%，脱落率≤3%。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：

（1）本发明生产的淡紫拟青霉菌剂的有效孢子量为2.0-2.2×10⁸cfu/g，杂菌率≤0.1%，脱落率≤3%。在本发明生产的淡紫拟青霉菌剂高效、低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高。

（2）本发明的生产方法工艺简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高，具有很高的经济价值和社会价值。

具体实施方式

实施例1一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法

本发明提供了一种生产工艺简单，生产成本极低，纯度和孢子含量高的淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，本发明的一种淡紫拟青霉菌剂的固体培养生产方法，包括以下步骤：

1、菌体分离培养

用常规组织分离法分离出淡紫拟青霉菌株，在PDA培养基上进行培养，并进行转管培养。