[发明专利]红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法及应用

权利要求书

1.一种红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法，其特征在于：首先通过重离子辐照对红球菌(Rhodococcus erythropolis YF28-1(8))基因组进行初次诱变，筛选出降解效果好的菌株再次通过超强诱变剂NTG对其进行复诱变，得到红球菌突变体库，再通过原油平板和和GC-MS的筛选，得到转录系统和翻译系统发生突变的菌株YF28-1-4。

2.根据权利要求1所述的红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)重离子辐照对红球菌进行初次诱变：将红球菌(Rhodococcus erythropolis YF28-1(8))制备为菌悬液，通过重离子辐照对菌悬液进行初次诱变，重离子束流为12C6+离子束，能量为831MeV，LET为45keV/μm，得到重离子辐照过的初次诱变菌悬液，通过原油平板筛选出降解效果好的菌株得到初次诱变红球菌；

2)接着用化学诱变剂NTG对红球菌进行复诱变：将初次诱变红球菌制备为菌悬液，以NTG母液对菌悬液进行复诱变，得到NTG处理过的复诱变菌悬液；

3)用原油平板筛选转录翻译系统发生突变的菌株：将步骤2)得到的NTG处理过的复诱变菌悬液培养至对数生长期前中期后，用牙签将菌液接种于以原油为唯一碳源的MM琼脂糖培养基中，在25℃的条件下培养7-15d，观察菌株在培养基上的生长情况，挑选菌落直径大的单菌落分别接于装有5mL液体培养基LB的试管中至对数生长期后，然后再接种于含有1％原油为唯一碳源的MM液体培养基中，进行GC-MS筛选，得到高效原油降解菌株YF28-1-4。

3.根据权利要求2所述的红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法，其特征在于：MM液体培养基的配方为：氯化镁3.5g，硝酸铵1.0g，氯化钾0.35g，氯化钙0.05g，溴化钾0.08g，氯化铁0.01g，硫酸锌0.01％与氯化锶2.4％混合的金属盐溶液1mL，磷酸氢二钾10％与磷酸二氢钾10％混合的磷酸盐溶液10mL，ddH2O 989mL，pH调节至7.5左右。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的红球菌菌株YF28-1-4的应用，其特征在于：菌株YF28-1-4应用在原油降解中。

5.根据权利要求1所述的红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法的应用，其特征在于：红球菌菌株YF28-1-4的诱变筛选方法应用在激活降解基因中。