[发明专利]一种阿普斯特中间体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及阿普斯特中间体的检测方法，属于药物分析技术领域，具体涉及(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的检测方法。

背景技术

(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐，其CAS号为608141-43-1，是生产阿普斯特的重要中间体，其手性纯度、异构体杂质直接影响阿普斯特的手性纯度、异构体杂质的含量，从而直接影响阿普斯特药物的疗效。

阿普斯特(Apremilast)是治疗活动性银屑病关节炎的口服药物，化学名称为(S)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基)苯基-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，CAS号608141-41-9。该药物在2014年3月以商品名Otezla(Apremilast)获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准，是FDA批准的首个也是唯一一个用于斑块型银屑病治疗的口服药，是选择性磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂。

目前，还未发现(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的手性纯度检测方法的相关文献及报道，为了加强(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐质量控制，需要研发出(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的检测方法，特别是其手性纯度的检测方法。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的检测方法。

(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的结构式为：

(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐的结构式为：

本发明采用以下技术方案：

一种阿普斯特中间体的检测方法，所述的阿普斯特中间体为(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐，采用高效液相色谱法进行检测，检测步骤如下：

(1)分别适量称取(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐、(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐这两种相应的工作品，并置于同一容量瓶中，用稀释液进行溶解定容，配制成一定浓度的系统适应性试验溶液；进一步地，所述系统适应性试验溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml；进一步优选地，所述系统适应性试验溶液的浓度为0.5mg/ml。

(2)取适量的供试品，精密称定，加稀释液稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液，配制成供试品溶液，可以理解为所述供试品溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml；

(3)精密量取系统适应性试验溶液，注入液相色谱仪，进样量为15～25μl，进一步优选地，所述进样量为20μl，记录色谱图。理论板数按(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐计算应不低于5000，异构体峰之间的分离度应不小于1.5。

根据《中国药典》，分离度(简称为R)也叫分辨率，是指相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，其计算公式为R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2))，tR1和tR2为相邻两峰的保留时间，W1和W2为其相应的峰宽。

分离度表示相邻两峰的分离程度，R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。

精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为15～25μl，进一步优选地，所述进样量为20μl，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与系统适应性溶液中异构体保留时间一致的色谱峰，按面积归一化法分别计算。

将所述系统适应性试验溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，采用面积归一化法进行检测，其色谱条件如下：

色谱柱：chiralcel AD-H；

流速：0.6～0.8ml/min；

柱温：10～40℃；

检测波长：228～232nm；