[发明专利]一种合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201711092675.3 | 申请日： | 2017-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN107805622B | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;陈坚;堵国成;邓洁莹;陈春梅;李江华 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P19/32;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 张伟朴 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合成 二磷酸 岩藻糖 重组 枯草 芽孢 杆菌 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组芽孢杆菌是通过强化表达枯草芽孢杆菌168的糖转运蛋白基因，并表达外源岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因得到的；且将枯草芽孢杆菌168的糖转运蛋白基因的启动子替换为强启动子P43，来强化表达枯草芽孢杆菌168的糖转运蛋白基因；所述糖转运蛋白基因如NCBI中Gene ID:936346所示；所述岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因为来源于脆弱拟杆菌9343的fkp基因，且所述脆弱拟杆菌9343的fkp基因如NCBI上GenBank:AY849806.1所示。
2.一种权利要求1所述的合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，该构建方法包括以下步骤：
(1)构建包含糖转运蛋白基因的上下游序列、P43启动子和博来霉素抗性基因序列的替换框，将构建好的替换框转化重组枯草芽孢杆菌168，通过验证，确认糖转运蛋白基因强化表达成功，得到重组枯草芽孢杆菌BSG；
(2)构建包含岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因的重组质粒，将构建好的重组质粒转化枯草芽孢杆菌BSG，通过验证，确认岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶表达成功，得到重组枯草芽孢杆菌BSGF。
3.根据权利要求2所述的合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，替换框的序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求2所述的合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，重组质粒的序列如SEQ ID NO.2所示。
5.权利要求1所述的合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，使用所述重组枯草芽孢杆菌发酵生成鸟苷二磷酸岩藻糖。
6.根据权利要求5所述的合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述发酵是将重组芽孢杆菌种子液以OD值为0.1-0.3的接种量接入发酵培养基中，在35-40℃、200-250rpm条件下培养20-25h。
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