[发明专利]检测六种禽源性成分的三重荧光PCR引物探针组、试剂盒及方法

权利要求书

1.检测六种禽源性成分的三重荧光PCR引物探针组，其特征在于：包括针对鸡、鸭、鹅源性成分的三重引物探针组A和针对鹌鹑、鸽子、石鸡源性成分的三重引物探针组B；

所述三重引物探针组A包括通用上游引物Seq.ID No.1、通用下游引物Seq.ID No.2、鸡源性探针Seq.ID No.3、鸭源性探针Seq.ID No.4、鹅源性探针Seq.ID No.5；

所述三重引物探针组B包括鹌鹑上游引物Seq.ID No.6、鹌鹑下游引物Seq.ID No.7、鸽子上游引物Seq.ID No.8、鸽子下游引物Seq.ID No.9、石鸡上游引物Seq.ID No.10、石鸡下游引物Seq.ID No.11、鹌鹑源性探针Seq.ID No.12、鸽子源性探针Seq.ID No.13、石鸡源性探针Seq.ID No.14；

所述鸡源性探针的5’端用FAM修饰，所述鸭源性探针的5’端用HEX修饰，所述鹅源性探针的5’端用TAMRA修饰，所述鹌鹑源性探针的5’端用FAM修饰，所述鸽子源性探针的5’端用HEX修饰，所述石鸡源性探针的5’端用TAMRA修饰，所述探针的3’端分别用NFQ-MGB修饰。

2.检测六种禽源性成分的三重荧光PCR试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物探针组、荧光PCR试剂、阳性对照、阴性对照、空白对照。

3.根据权利要求2所述的检测六种禽源性成分的三重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述通用上游引物和通用下游引物的浓度分别为30μmol/L；所述鹌鹑上游引物、鹌鹑下游引物、鸽子上游引物、鸽子下游引物、石鸡上游引物和石鸡下游引物的浓度分别为10μmol/L，所述鸡源性探针、鸭源性探针、鹅源性探针、鹌鹑源性探针、鸽子源性探针和石鸡源性探针的浓度分别为10μmol/L。

4.根据权利要求2所述的检测六种禽源性成分的三重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为用权利要求1中包含的引物组进行扩增，并用权利要求1中包含的探针组检测的混合DNA片段或基因组，浓度为10⁵copies/μL级。

5.根据权利要求2所述的检测六种禽源性成分的三重荧光PCR试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为非禽源性DNA。

6.检测六种禽源性成分的三重荧光PCR方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)进行样品前处理，提取样品DNA；

2)建立包括权利要求1所述的三重引物探针组A和三重引物探针组B的多重荧光PCR反应体系，反应条件为：95℃20-120s或10-15min；95℃5-60s，60℃20-120s；40循环并收集荧光信号，根据荧光信号变化进行禽源性成分检测结果的判断。

7.根据权利要求6所述的检测六种禽源性成分的三重荧光PCR方法，其特征在于：所述检测结果的判断方法包括：

①质控标准：阳性对照的三重引物探针组A和三重引物探针组B的PCR反应体系中，FAM、HEX、TAMRA均有荧光对数增长，且Ct值≤30.0，阴性对照和空白对照均无荧光信号和对数增长，且Ct值≥40.0，进行②的禽源性成分检测结果的判断；

②样品检测结果的判断：样品的三重引物探针组A的PCR反应体系中，FAM和/或HEX和/或TAMRA有荧光对数增长，且Ct值≤30.0时，则含有相应的鸡和/或鸭和/或鹅源性成分；样品的三重引物探针组B的PCR反应体系中，FAM和/或HEX和/或TAMRA有荧光对数增长，且Ct值≤30.0时，则含有相应的鹌鹑和/或鸽子和/或石鸡源性成分；若上述一种或几种荧光无信号及对数增长，则不含相应的禽源性成分；若30.0Ct值40.0时，增加模板量复检，Ct值≥40时，则检测结果为阴性，Ct值40时，则检测结果为阳性。