[发明专利]一种快速检测β‑内酰胺类抗生素残留的方法

权利要求书

1.一种快速检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：包括下列步骤：

第一步：制备氨苄青霉素-BSA

将氨苄青霉素钠盐溶于二甲基甲酰胺，搅拌至全部溶解后得A液；将牛血清白蛋白溶于pH值为7.4的PBS缓冲液中，搅拌至完全溶解后得B液；在搅拌条件下，将A液加入到 B 液中，然后向其中逐滴、均匀加入体积分数为25%的戊二醛水溶液，搅拌条件下，避光反应，所得产物用0.05M的 pH值为7.4的PBS缓冲液透析，获得包被原，即氨苄青霉素-BSA偶联物；

第二步：光纤传感器抗原包被修饰

将APS光纤传感器末端没入包被原溶液中，室温静置5 min；再将APS光纤生物传感器末端没入质量分数为15%的蔗糖水溶液中，室温静置1 min，然后室温晾干后置于2～8℃干燥条件下保存，备用；

第三步：非标记检测

将氨苄青霉素-BSA偶联物用pH值为7.4的PB缓冲液稀释20倍，取200 μL于微孔板的第2列中；将β-内酰胺类抗生素受体用巴氏杀菌奶稀释60倍，然后用该液体稀释氨苄青霉素标准品到100、50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 ng/mL，分别取200 μL于微孔板的第4列中；往微孔板的第1列中加入200 μL水，往第3列加入200 μL巴氏杀菌奶；用APS光纤传感器探头进行检测：第一列60 s，第2列60 s；第3列60 s；第4列300 s；

第四步：金标记检测

向1mL胶体金中加入1μL 2mg/mL的β-内酰胺类抗生素受体，涡旋混匀，室温静置15min，加入100μL的质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液，室温封闭15min，10000 rpm离心10 min，弃掉上层清液，加入90μL pH 值为7.4的PBS缓冲液，重悬颗粒，得到金标β-内酰胺类抗生素受体；

将氨苄青霉素-BSA偶联物用pH值为7.4的PB缓冲液稀释20倍，取200μL于微孔板的第2列中；用巴氏杀菌奶稀释氨苄青霉素标准品到50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 ng/ml，分别取200 μL于微孔板的第4列中，另外每孔添加50μL反应液和5μL金标β-内酰胺类抗生素受体；往微孔板的第1列中加入200μL水，往微孔板的第3列加入200 μL 巴氏杀菌奶、50 μL反应液、5μL金标BSA；用APS光纤传感器探头进行检测：第一列60s，第2列60s；第3列60s；第4列600s。

2.根据权利要求1所述的快速检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：还包括APS光纤传感器的再生，包括：

平衡：将APS光纤传感器末端没入空白基质底液中120s，该空白基质底液中含有200μL的底液、50μL的反应液和5μL的金标BSA；

测试：将APS光纤传感器末端没入氯霉素素检测阴性底液中600s，该氯霉素素检测阴性底液中含有200μL氯霉素素检测阴性样液、50μL反应液和5μL金标氯霉素素受体；

再生：将光纤生物传感器探头底部没入甘氨酸和二甲基甲酰胺混合液中30s，所述甘氨酸和二甲基甲酰胺混合液由pH值为 3的0.1 M的甘氨酸与二甲基甲酰胺按照4：1的体积比混合构成；

洗涤：用pH值为 7.4的PBS缓冲液洗涤光纤生物传感器探头底部。

3.根据权利要求1所述的快速检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述反应液为pH 值为7.4的PBS缓冲液。

4.根据权利要求2所述的快速检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：所述底液为奶粉溶于水后制得，其质量分数为10%。

5.根据权利要求1所述的快速检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：将149 mg氨苄青霉素钠盐溶于8mL二甲基甲酰胺，搅拌至全部溶解后得A液；将204mg牛血清白蛋白溶于16mL的pH值为7.4的PBS缓冲液中，搅拌至完全溶解后得B液。