[发明专利]一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法

权利要求书

1.一种核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

采用50％乙醇加热回流方法提取核桃花药材，浓缩、复溶、超声、过滤后得到供试品溶液，将所述供试品溶液采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法进行检测；

应用Analyst TF 1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的色谱条件进行设定，参数设置如下：

色谱柱为ACQUITY BEH C₁₈，100mm×2.1mm，1.7μm；以0.1％甲酸-水为流动相A，以甲醇为流动相B，线性梯度洗脱，0～1min，20％～35％B；1min～5min，35％～80％B；5min～15min，80％～100％B；15min～17min，100％B；17.1min～20min,20％B，体积流量为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量10μL。

2.根据权利要求1所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：应用Analyst TF 1.7.1软件对所述超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法中的质谱条件进行设定，参数设置如下：

UPLC-Triple-TOF 5600+飞行时间液质联用仪：正离子扫描模式；扫描范围：m/z 100～1200；离子源温度：150℃；离子源电压：4500V；去溶剂气N₂：110psi；去溶剂气温度：600℃；气帘气N₂：35psi；一级扫描：去簇电压DP：80V；二级扫描：使用TOF MS～Product Ion～IDA模式采集质谱数据，CID能量为20～50eV。

3.根据权利要求2所述的核桃花中黄酮类化学成分的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液制备具体包括如下步骤：取核桃花药材1.0g至50mL烧瓶，50mL 50％乙醇加热回流提取2次，第一次提取30min，第二次提取1h，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至干，5mL甲醇复溶，超声30min，用甲醇补齐至原总重量，0.22μm微孔滤膜过滤，并保存在4℃冰箱中作为供试液。

4.一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法，其特征在于：包括如下步骤：采用权利要求2的方法对核桃花中黄酮类化学成分进行检测，获得化合物的总离子流图、一级质谱信息以及二级质谱信息，并应用PeakView 2.2软件对检测结果中的化学成分信息进行分析，所述PeakView 2.2中包括MasterView 1.1插件：

(1)在MasterView 1.1中打开采集的核桃花样品信息，设置分析参数如下：响应值1000counts；信噪比：10；提取离子宽度：0.02Da；保留时间宽度：2min；阈值：100cps；最小保留时间：0.3min；分子量误差：10ppm；

(2)根据现有包含948种中药中黄酮类化合物的数据库以及已有文献报道在胡桃属中发现的黄酮化合物为依据，将其分子式导入MasterView 1.1，同时在MasterView 1.1中设置每个化合物分子离子的加和形式为[M+H]⁺或者[M+Na]⁺，依据分子式及分子量与核桃花数据利用MasterView 1.1进行匹配，得到所有导入的化合物信息与实验所得数据匹配的结果列表；结果中符合步骤(1)中所设置参数的化合物信息则显示绿色，不符合则不显示绿色，通过MasterView 1.1软件筛选出结果中符合参数设置，即显示为绿色的化合物，并将符合参数设置的化合物列表中的信息导出，所述信息包括分子式、理论分子量、实际分子量、加和形式、误差、响应值、保留时间；

同时将点击每个化合物信息，在MasterView 1.1中显示的与点击的化合物对应的一级质谱图以及二级质谱图逐个导出并保存，以便下一步分析；

(3)为了防止数据库及文献报道的化合物在软件匹配过程中由于误差造成有效信息被过滤，所以在步骤(1)中设置的参数中分子量误差：10ppm，此范围较大，因此需要进一步进行逐个分析筛选；

应用Analyst TF 1.7.1＞＞Calculators＞＞Isotopic Distribution软件计算每一个化合物分子式分子离子的精确质量数，与步骤(2)中记录的化合物一级质谱信息，根据公式：

误差ppm＝(实际分子量-理论分子量)/理论分子量×10⁶

剔除计算结果误差大于5ppm的化合物；

(4)为提高鉴定的可信度，将步骤(3)中剔除部分化合物后的结果进行二级质谱分析：根据文献、mzCloud质谱数据库以及黄酮类化合物的裂解规律分析化合物的裂解途径，若实验中所得二级质谱信息有两个碎片离子符合该化合物的裂解规律，且碎片离子的实际分子量与理论分子量的误差范围小于15ppm，则认为实验样品中存在该化合物，误差计算公式与步骤(3)中相同。