[发明专利]一种福氏紫薇组培再生体系建立的方法

说明书

本发明涉及一种福氏紫薇组培再生体系建立的方法，该方法利用福氏紫薇种子萌发获得无菌实生苗，然后剪取幼嫩叶片为外植体，通过对外植体进行脱分化培养，获得再分化能力强的愈伤组织，进而利用愈伤组织进行再分化培养和后续的生根培养实现再生植株。本发明利用无菌实生苗为外植体，避免了传统的外植体由于分化程度高而脱分化不易和污染率高的问题，操作简单、可行。具体包括以下几个步骤：1.实生无菌苗的获得；2.愈伤组织的诱导；3.愈伤组织的继代和增殖；4.愈伤组织的再分化；5.生根培养；6.植株再生。本发明中褔氏紫薇的愈伤增殖倍数达2.1倍，组培再生率达到95%以上，为紫薇遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础。

技术领域

本发明涉及一种福氏紫薇组培再生体系建立的方法，属于木本植物组织培养技术领域。

背景技术

紫薇（Lagerstroemia indica）属于千屈菜科（Lythraceae）紫薇属，别名“百日红”、“满堂红”。紫薇原产中国，是我国传统名花之一。国内应用的主要有大花紫薇（L.speciosa）、福建紫薇（L.limii）、南紫薇（L.subcostata）等，国外广泛栽培的也只有大花紫薇和紫薇两个种。紫薇通常用作落叶灌木或乔木栽植，由于紫薇树干光滑，树姿优美，适应性强，常作为行道树、街景树栽培，有些城市以紫薇作为市花（树）。

在育种方面，美国育种学家从1962年开始进行紫薇的育种研究，通过种内、种间杂交育种，选育出抗白粉病且花色红艳的品种，日本Takii 种苗株式会社利用从我国引进的紫薇资源，选育出矮生多花品种。近年来，我国也开始充分利用国内丰富的紫薇资源进行杂交育种及相关的研究，有望选育出一批有观赏价值的新品种，从而更好的丰富紫薇园林应用品种。

由于传统的遗传育种具有较大的盲目性，选育周期长等缺点，而现代的细胞工程育种和分子育种等手段克服了这些缺点。近年来，木本植物组织培养研究获得了很大进展，如杨树、梅花、桉树、悬铃木等，其再生可通过体细胞胚发生途径或器官发生途径来完成，但对于木本植物，从营养器官诱导体细胞胚非常困难。通过组织培养的方法使植株再生是对植物进行转基因改良的重要前提条件，目前绝大多数的遗传转化体系都需要建立一个稳定的植株再生体系来进行基因的转移、转化植株的选择和再生，包括直接或间接的再生体系已被广泛用于植株遗传改良。

发明内容

为给紫薇遗传转化奠定基础，本发明提供一种福氏紫薇（大红花紫薇：LagerstroemiaבTuscarora’）组培再生体系建立的方法。

为达到上述目的，本发明提供了一种福氏紫薇组培再生体系的方法，具体步骤如下所述：

本发明提供了一种福氏紫薇组培再生体系的方法，具体步骤如下所述：

1）实生无菌苗的获得

采收褔氏紫薇健康母树上发育良好的种子，人工去掉种翅并防止损伤种皮，进行消毒：先用自来水冲洗30min，然后75％乙醇处理30s； 1% 次氯酸钠灭菌 15min，然后无菌水冲洗 5 次，消毒后播种于 MS 基本培养基中，获得生长健壮的实生苗；

2）愈伤组织的诱导

剪取步骤（1）中无菌培养20天的叶片，垂直叶片主脉剪 3～4 下，保持一侧叶缘相连，叶片正面朝上接种于愈伤诱导培养基1/2MS+6-BA 1.0mg/L +2, 4-D 1.0 +蔗糖30g/L+琼脂7g/L中，暗培养处理7天，培养温度25℃左右，光照强度2000-3000lx，光照时间14h/d；

3）愈伤组织的继代和增殖