[发明专利]一种羊绒、牦牛绒混合物定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及毛纺混合物检测技术领域，特别是涉及一种基于荧光定量PCR的羊绒、牦牛绒混合物定量检测方法。

背景技术

随着人们对绿色生活方式的倡导，传统的特种动物纤维产业蓬勃发展，羊毛、羊绒、驼绒、牦牛绒纤维等成为秋冬季最受欢迎的保暖纺织材料。

羊绒产自山羊，是山羊外表皮特有的一层薄薄地掩在粗毛根部的细绒，仅占动物纤维总产量的0.2％，集纤细、柔软、滑糯、保暖等特点于一身，被称为纤维界的“软黄金”。绒山羊严苛的生存环境决定了绒产量的有限和资源稀缺，羊绒主要产自中国、印度、伊朗、蒙古。无论数量还是品质，我国的山羊绒都是最优的，产量占了全世界产量的75％，出口创汇可观，也对西部经济发展有着重要的作用。

牦牛是一种能在高原高寒的恶劣环境下生存的哺乳动物，被称为高原之舟，生长于青藏高原及其毗邻地区的高寒地带，是牛科动物唯一有纺织利用价值的成员。牦牛厚长的毛层下聚集着细密的绒毛，这些绒毛为牦牛在高寒的天气状况下生存提供了可能。我国是世界上牦牛数目最多的国家，约占全世界总数的90％。牦牛绒很细，直径18μm-20μm，长度为35mm-50mm，有不规则弯曲，鳞片呈环状紧密抱合，光泽柔和，弹性强，手感滑糯。

绝大多数牦牛绒呈棕色。牦牛绒与紫山羊绒在外表形态上很相似，两者都在显微镜下均存在色素团，给鉴别工作带来了困难。细度相近的紫羊绒与牦牛绒的外观形态非常相似，鳞片的密度、厚度也相近，纤维边缘整齐，平滑，特别像羊绒。一些不法分子利用这一相似性，将牦牛绒充作紫山羊绒坑害给消费者，从中牟利。我国现行的标准GB/T 16988－2013《特种动物纤维与绵羊毛混合物含量的测定》对牦牛绒的描述：牦牛绒纤维鳞片张角较小，鳞片密度为100－130个/mm,毛色为黑色、棕褐色。而在一般的光学显微镜下，鳞片并不是很清晰，检测起来费时费力。电镜法成本高，且制样比较繁琐。由于本身带有色素，紫山羊和牦牛绒通常会被制成深色的织物，这就进一步给检测鉴别工作增加了难度。

发明内容

本发明提供了一种羊绒、牦牛绒混合物定量检测方法。

本发明提供了如下方案：

一种羊绒、牦牛绒混合物定量检测方法，包括：

A)制备标准混合样，取羊绒、牦牛绒制作羊绒、牦牛绒不同混合比例的标准混合样；

B)DNA提取，分别对所述不同混合比例的标准混合样进行DNA提取，分别对提取到的所述不同混合比例的标准混合样的DNA进行PCR检测，获得不同混合比例的标准混合样中对应的羊绒的CT值Ct_cashmere以及牦牛绒的CT值Ct_yak；

C)标准曲线的建立，将获得到的不同混合比例的标准混合样中对应的羊绒的CT值Ct_cashmere以及牦牛绒的CT值Ct_yak分别做差值运算，获得不同混合比例的标准混合样对应的Ct_cashmere与Ct_yak的差值ΔCt；以获得的所述不同混合比例的标准混合样对应的ΔCt为横坐标，以对应的不同混合比例的标准混合样中羊绒与牦牛绒的含量的比值的对数为纵坐标取点进行曲线拟合获得所述标准曲线；

D)待检测混合物的定量检测，取所述检测混合物进行DNA提取，对提取到的所述待检测混合物的DNA进行PCR检测，获得待检测混合物中对应的羊绒的CT值Ct｀_cashmere以及牦牛绒的CT值Ct｀_yak，将获得到的Ct｀_cashmere以及Ct｀_yak做差值运算，获得待检测混合物对应的Ct｀_cashmere与Ct｀_yak的差值ΔCt｀；通过所述ΔCt｀位于所述标准曲线内的横坐标上的位置点确定其对应的所述标准曲线上的点对应的纵坐标上的点，将获得的所述纵坐标上的点进行羊绒与牦牛绒的比值的对数逆运算获得所述待检测混合物中羊绒与牦牛绒的比值。

优选的：所述步骤A)中取直径相近的100％的羊绒、100％的牦牛绒制作5种羊绒、牦牛绒不同混合比例的标准混合样；所述羊绒与牦牛绒的混合比例分别为1:9、3:7、5:5、7:3、9:1。

优选的：所述步骤B)中使用液氮冷冻研磨仪分别对所述不同混合比例的标准混合样进行粉碎后，分别对所述不同混合比例的标准混合样进行DNA提取。