[发明专利]HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和应用

权利要求书

1.一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统，其特征在于，包括第一PCR扩增引物对，所述第一PCR扩增引物对中上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；

还包括第二PCR扩增引物对，所述第二PCR扩增引物对中上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

2.如权利要求1所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统在制备检测HBV核苷类似物耐药突变位点的试剂中的应用。

3.一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统。

4.如权利要求3所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒，其特征在于，还含有阳性对照试剂和/或阴性对照试剂，所述阳性对照试剂呈HBV阳性，所述阴性对照试剂呈HBV阴性。

5.如权利要求3所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒，其特征在于，还含有HBV核酸提取试剂、PCR扩增试剂以及测序试剂中的至少一种试剂。

6.一种HBV核苷类似物耐药突变位点的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取待测HBV核酸样品；

使用如权利要求1所述的PCR引物系统中的第一PCR扩增引物对对所述HBV核酸样品进行PCR扩增；

对PCR扩增产物进行测序分析；

此外，还包括以下步骤：对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对于未达到测序要求的PCR扩增产物以权利要求1所述的PCR引物系统中的第二PCR扩增引物对进行第二轮的PCR扩增，再对第二轮的PCR扩增产物进行测序分析。

7.如权利要求6所述的HBV核苷类似物耐药突变位点的检测方法，其特征在于，PCR扩增的条件统一是：先95℃、30秒；再95℃、15秒，58℃、15秒，72℃、30秒共处理40个循环；最后72℃延伸5分钟。

8.如权利要求6所述的HBV核苷类似物耐药突变位点的检测方法，其特征在于，所述测序是Sanger测序，测序使用的引物对与扩增得到的测序对象所使用的PCR扩增引物对相同。