[发明专利]HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和应用

说明书

本发明公开了一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和应用。该HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统包括第一PCR扩增引物对，所述第一PCR扩增引物对中上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。该HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和相关应用，可用于检测HBV基因型，尤其是核苷类似物耐药突变位点，从而有利于判断HBV预后及治疗效果，为慢性乙肝患者制定个体化的抗病毒治疗方案提供帮助，如辅助临床用药，使临床用药更加合理有效。上述PCR引物系统扩增有效性高，可达97％以上，并且再现重复性好，尤其是最低检出限低，有利于对低HBV核酸浓度的样品进行检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，尤其是涉及一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和应用。

背景技术

HBV是一种经血液传播的嗜肝DNA病毒，根据HBV全基因核苷酸序列异源性≥8％或者S基因区核苷酸序列异源性≥4％，可将不同病毒株分为不同的基因型。迄今为止，HBV可以分为8个基因型，即A、B、C、D、E、F、G和H型。我国的HBV基因型主要有B型和C型，此外还有少数的A型、D型和C/D重组型。

HBV是导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌的重要因素。抗病毒治疗是最常见的乙肝治疗方式。公认的HBV治疗用的抗病毒药物主要有干扰素和核苷(酸)类药物两类。核苷(酸)类药物因口服方便、毒副作用少、病毒载量下降较快而受到广泛关注。但长期服用核苷(酸)类药物易产生耐药，如随着用药时间的延长，对药物敏感的野生株数量将下降，而具有耐药突变的变异株因对药物不敏感，得以不断复制、增加，使得肝炎复发。

HBV基因型与感染后临床表现、预后及治疗应答均有密切联系。HBV不同的基因型在针对慢性乙型肝炎患者的抗病毒治疗疗效上存在差异。HBV A型对干扰素治疗的应答率高于D型，B型高于C型，而A和D型又高于B和C型；HBV B型在用拉米夫定治疗停药后反跳较低，而HBV C型则反跳较高。

因此通过检测HBV基因型，尤其是HBV核苷类似物耐药突变位点的检测，有助于判断疾病预后、治疗效果、制定个体化抗病毒治疗方案，并有利于指导用药，使得临床用药更加合理有效。

发明内容

基于此，有必要提供一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统、方法和应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下。

一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统，包括第一PCR扩增引物对，所述第一PCR扩增引物对中上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示。

在其中一个实施例中，所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统还包括第二PCR扩增引物对，所述第二PCR扩增引物对中上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

上述HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统可应用在制备检测HBV核苷类似物耐药突变位点的试剂中。

一种HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒，含有上述任一实施例所述的HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的PCR引物系统。

在其中一个实施例中，所述HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒还含有阳性对照试剂和/或阴性对照试剂，所述阳性对照试剂呈HBV阳性，所述阴性对照试剂呈HBV阴性。

在其中一个实施例中，所述HBV核苷类似物耐药突变位点检测用的试剂盒还含有HBV核酸提取试剂、PCR扩增试剂以及测序试剂中的至少一种试剂。

一种HBV核苷类似物耐药突变位点的检测方法，包括如下步骤：

获取待测HBV核酸样品；