[发明专利]传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的RAA恒温荧光检测方法及试剂

权利要求书

1.一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）核酸的检测试剂盒，包括：对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒正向引物、反向引物以及特异性荧光探针，其中所述对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LCRED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种；还包括对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒标准品和ddH₂O中至少一种。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括A Buffer和B Buffer，所述ABuffer为20% PEG ；所述B Buffer为280mM MgAc。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括RAA干粉试剂，所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μL recA重组酶蛋白或30ng/μLRad51、30ng/μL Bsu DNA聚合酶，100mmol/L Tricine、20% PEG、5mmol/L 二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、Exo核酸外切酶。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的试剂盒，对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒标准品为含有对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒保守区基因部分序列的阳性质粒，所述阳性质粒中含有的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒保守区基因部分序列如SEQ ID NO.4所示。

5.对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的RAA恒温荧光检测方法，所述方法用于非疾病诊断用途，其步骤为：提取待测样品的DNA，以待测样品的DNA 为模板，在对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的正向引物、反向引物、特异性荧光探针及RAA干粉试剂、A Buffer、BBuffer和ddH₂O存在下进行实时荧光RAA反应，根据实时荧光RAA扩增曲线分析待测样品；其中所述对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示，所述对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2 所示，所述特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQID No.3，其5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述A Buffer为20% PEG ；所述B Buffer为280mM MgAc；所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μL recA重组酶蛋白或30ng/μL Rad51、30ng/μL Bsu DNA聚合酶，100mmol/L Tricine、20% PEG、5mmol/L 二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、Exo核酸外切酶。