[发明专利]一种制备玉米醇溶蛋白降血压肽的方法

说明书

本发明公开了一种制备玉米醇溶蛋白降血压肽的方法，涉及农副产品深加工领域。具体涉及一种在低浓度的乙醇环境下，依次采用胰酶和胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白制备高活性降血压肽的方法。本发明避免了玉米醇溶蛋白在水溶环境下溶解性差，酶解效率低的问题。在低浓度乙醇环境下，胰酶和胃蛋白酶具有较高活性，同时玉米醇溶蛋白溶解性很好，从而显著提高了酶解效率，大幅提高酶解产物降血压活性，降低制备成本。

技术领域

本发明涉及农副产品深加工领域，具体涉及在醇溶环境下，由于胰酶和胃蛋白酶对乙醇有较好耐受性，依次酶解玉米醇溶蛋白制备降血压肽的方法。

背景技术

玉米醇溶蛋白资源丰富。我国是玉米生产大国，2014年玉米年产量2.15亿吨。玉米淀粉生产过程中的主要副产物为玉米蛋白粉，其中醇溶蛋白占50％～60％。玉米醇溶蛋白营养成分丰富，且不含有毒有害物质，目前利用玉米醇溶蛋白的成膜性、抗氧化性，被广泛应用于包装、保鲜等领域，但是其高值化利用度低。近年来研究表明玉米醇溶蛋白是制备降血压肽非常理想的蛋白资源，且大多采用酶解法制备玉米醇溶蛋白降血压肽。但是，玉米醇溶蛋白富含谷氨酸、亮氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸等疏水性氨基酸，易溶于乙醇溶液，难溶于水，即使是水解能力极强的碱性蛋白酶也很难“进攻”其酶切位点，不仅酶解效率低，而且碱性蛋白酶价格昂贵，提高了制备成本。

胰酶(含胰蛋白酶和糜蛋白酶等)和胃蛋白酶是动物体内重要的消化性蛋白酶，其具有较强的专一性，其中胰蛋白酶对碱性氨基酸组成的肽键具有高度专一性，糜蛋白酶能专一水解Tyr、Trp和Phe羧基端肽键。贾俊强研究的降血压肽构效关系表明酶解制备降血压肽时，首选酶切位点在Tyr、Pro、Trp、Phe和Leu羧基端的蛋白酶(贾俊强.超声对酶法制备小麦胚芽降血压肽的影响及其作用机理[D].江苏大学，2009.)。其中胃蛋白酶能够优先断裂由色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸或亮氨酸等疏水性氨基酸形成的肽键。胰酶和胃蛋白酶的提取工艺简单，不涉及纯化工艺，且价格低廉。在水溶环境下，玉米醇溶蛋白溶解性差，胃蛋白酶、胰酶很难接触到其酶切位点，且其水解能力不如碱性蛋白酶，但是，胰酶和胃蛋白酶对乙醇具有很强的耐受性，研究其在醇溶液中酶解玉米醇溶蛋白制备生物活性肽，还未见报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服已有技术存在的问题，提供一种在醇溶环境下，利用胃肠消化酶(胃蛋白酶和胰酶)酶解玉米醇溶蛋白制备降血压肽的方法。具体为在低浓度的乙醇环境中，依次利用胰酶、胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白，制备高活性的降血压肽。

为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：

一种制备玉米醇溶蛋白降血压肽的方法，按照下述步骤进行：

将玉米醇溶蛋白用60％-70％的乙醇溶解后，调节温度至35～50℃，加入含有胰酶的水溶液进行酶解，使得乙醇终浓度降为15～20％，蛋白终浓度1.5％(m/v)胰酶添加量3％～5％(E/S)，采用NaOH溶液维持pH为7.5～8.5，酶解3～6h后结束，加入HCl调节pH为1.5～2.0，pH稳定后，加入胃蛋白酶进行酶解，胃蛋白酶添加量3％～5％(E/S)，维持pH为1.5～2.0，酶解2～4h后，调pH为碱性终止反应，旋转蒸发去除乙醇，补水后灭酶，离心，收集上清液，干燥。

本发明的优点：在醇溶环境下，用胰酶和胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白制备降血压肽的优势，一方面，玉米醇溶蛋白易溶于60％的乙醇，将该体系缓慢加水稀释至15～20％乙醇溶液，玉米醇溶蛋白在短时间内不会聚集析出，有效增加酶与蛋白的接触面积，更有利于酶“进攻”其酶切位点；另一方面，胰酶和胃蛋白酶对乙醇具有很好的耐受性，胰酶和胃蛋白酶是常用的制备降血压肽的蛋白酶，且价格便宜。本发明在蛋白酶活性较高的条件下，不仅有效提高玉米醇溶蛋白的溶解性，而且有效提高酶解产物降血压肽的活性，从而有效降低生产成本。

下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

具体实施方式