[发明专利]一种检测病毒多种分型的方法和检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测人乳头瘤病毒(HPV)多种分型的非疾病诊断目的的方法，其包括以下步骤：

1)确定病毒及其不同亚型；

2)引物和探针设计：采用PCR扩增方法结合荧光探针检测技术，分别对病毒的不同亚型设计特异性引物和探针；

3)设计一个或多个筛选组合及其对应的分型组合，其中，通过筛选组合对病毒亚型进行初步筛分，由此确定待测样本的病毒亚型所属的亚组，以及通过分型组合确定病毒亚型，

其中，每个筛选组合包含针对病毒不同亚型的引物和探针，并且每个筛选组合通过在探针上引入用不同的荧光基团而被分成若干亚组，其中每个亚组中针对病毒不同亚型的探针标记相同的荧光基团，并且

其中，每个对应的分型组合包含针对病毒不同亚型的引物和探针，并且其包含的针对病毒不同亚型的探针与上述每个亚组中针对病毒不同亚型的探针相对应，并且每个对应的分型组合所包含的针对病毒不同亚型的探针分别标记不同的荧光基团；

4)运用步骤3)中设计的筛选组合在进行PCR扩增的同时使用荧光监测系统检测不同波长的荧光信号，以确定待测样本的病毒亚型所属的亚组；

5)在确定待测样本的病毒亚型所属的亚组后，选择其对应的分型组合，在进行PCR扩增的同时使用荧光监测系统检测不同波长的荧光信号，根据检测的荧光信号确定病毒分型，

其中，所述人乳头瘤病毒(HPV)的分型分别如下：HPV16、HPV18、HPV31、HPV56、HPV58、HPV33、HPV66、HPV35、HPV53、HPV51、HPV52、HPV45、HPV73、HPV59、HPV72、HPV54、HPV6、HPV11、HPV39、HPV68、HPV26、HPV81、HPV61、HPV44、HPV40、HPV43、HPV42、HPV83；

其中，所述荧光基团包括FAM、VIC、ROX以及CY5；以及

通过下表中列出的筛选组合和分型组合来检测HPV的所述28种亚型：

2.一种用于检测人乳头瘤病毒多种分型的试剂盒，其中，所述试剂盒用于检测以下列出的HPV的28种亚型：HPV16、HPV18、HPV31、HPV56、HPV58、HPV33、HPV66、HPV35、HPV53、HPV51、HPV52、HPV45、HPV73、HPV59、HPV72、HPV54、HPV6、HPV11、HPV39、HPV68、HPV26、HPV81、HPV61、HPV44、HPV40、HPV43、HPV42、HPV83，

所述试剂盒包含下表中列出的筛选组合和分型组合：

上表中的每个筛选组合中包含针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针及上游引物和下游引物，并且每个筛选组合中通过在探针上引入用不同的荧光基团而被分成若干亚组，其中每个亚组中针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针标记相同的荧光基团；以及

上表中的每个分型组合包含针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针及上游引物和下游引物，并且其包含的针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针与上述每个亚组中针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针相对应，并且每个分型组合所包含的针对人乳头瘤病毒不同亚型的探针分别标记不同的荧光基团。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，每个筛选组合进一步包含：PCR缓冲液、UDG酶、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O；每个分型组合进一步包含：PCR缓冲液、UNG酶、Taq DNA聚合酶以及ddH₂O。