[发明专利]一种自身免疫性肝炎模型及利用该模型筛选的药物

权利要求书

1.一种小鼠自身免疫性肝炎模型的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

（1）AAGL的制备：a）天然纯化：将茶树菇用ddH₂O或磷酸缓冲液浸泡，浸泡液利用硫酸铵沉淀法，透析得到总蛋白；然后利用lactose-Sepharose 6B的亲和层析柱得到目的蛋白AAGL，AAGL在ddH₂O中透析过夜，透析液冻干；

或者b）重组表达：将AAGL的编码cDNA序列克隆到表达载体，转入大肠杆菌中，进行表达，用lactose-Sepharose 6B亲和纯化或者用标签亲和纯化；

（2）将步骤1制得的AAGL的冻干粉末用PBS溶解，配成0.25 mg/ml的浓度，用0.22μm的滤器过滤后，按照小鼠体重尾静脉注射到C57BL/6小鼠中，3小时以后可以检测到ALT（谷丙转氨酶）和AST（谷草转氨酶）有显著增加，一直到12小时后ALT和AST缓慢下降，至24小时恢复正常水平；6-9小时是检测肝炎症状的最佳时间；

所述自身免疫性肝炎的症状包括：

（1）对于传统免疫抑制剂的治疗不敏感，所述的治疗不敏感包括：治疗后症状没有减轻，或者症状加重；所述传统免疫抑制剂包括：强的松龙联合咪唑硫嘌呤、强的松龙不联合咪唑硫嘌呤、霉酚酸酯、英夫利昔、布地奈德、他克莫司或环孢霉素中的任意一种或多种；

（2）肝脏组织中Treg的比率升高，同时Treg被激活，肝脏中IL-10的表达量升高，炎性细胞在肝脏中聚集并激活；所述炎性细胞包括：T细胞、NK细胞或NKT细胞中的任意一种或多种。

2.经过权利要求1的制备方法得到的小鼠自身免疫性肝炎模型筛选获得的药物醋酸格拉替雷在制备治疗自身免疫性肝炎的药物中的应用，其特征在于，所述的自身免疫性肝炎发病期间，肝脏组织中Treg的比率升高，同时Treg也被激活，肝脏中IL-10的表达量显著升高；大量炎性细胞在肝脏中聚集并激活，发生细胞因子风暴。