[发明专利]一种制备高纯度多肽或其类似物的方法

说明书

本发明公开了一种制备高纯度多肽或其类似物的方法，具体步骤如下：采用高效液相色谱法制备纯化AMG416水溶液，收集目的峰馏分，其中，色谱条件为：固定相为C18，流动相A为磷酸盐、甲酸盐或者乙酸盐水溶液，流动相B为甲醇或者乙腈，流动相A与流动相B的体积比为(80～100)：(0～20)。本发明方法可以高效分离纯化AMG416，收率高，得到的产品纯度高，工业应用前景非常好。

技术领域

本发明涉及一种制备高纯度多肽或其类似物的方法。

背景技术

继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT，简称继发性甲旁亢)，是指在慢性肾功能不全、肾小管酸中毒、维生素D缺乏等情况下，甲状旁腺长期受到低血钙、低血镁或高血磷的刺激而分泌过量的PTH的一种慢性代偿性临床表现，长期的甲状旁腺增生最终导致形成功能自主的腺瘤。目前，治疗继发性甲状旁腺功能亢进的常用药物是安进公司(Amgen)生产的西那卡塞，其自十多年前上市以来增长相当稳定，2014年仅美国本土销售额就高达到10亿美元。

AMG416(又名vecalcetide、etelcalcetide)是安进公司开发的一种新的拟钙剂(Calcimimetic agent)，其结构如下：

AMG416通过静脉给药，用于正接受血液透析治疗的慢性肾脏病(CKD)患者。AMG416结合并激活对甲状旁腺上的钙敏感受体，从而实现甲状旁腺激素(PTH)水平的降低，已完成的Ⅲ期临床证实该药疗效确切，安全性良好，患者依从性更高，轻松击败了目前常用的药物西那卡塞(Mimpara)。因此，如何高效制备纯化得到高纯度AMG416就显得极为重要。

然而，由于AMG416极性较大而且不稳定，对其进行纯化非常困难，采用一些常规的纯化方法进行纯化的收率非常低。CN201080045024、WO2015154031的专利申请中公开说明了AMG416可以使用反相高效液相(RP-HPLC)纯化，但对具体制备用流动相体系、方法未做详细说明。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种制备高纯度多肽或其类似物，尤其是制备高纯度AMG416的方法。

本发明中，AMG416是指结构如下的多肽：

本发明涉及一种制备高纯度多肽或其类似物的方法，其中包括：

步骤(1)：制备多肽或其类似物的水溶液，其中，多肽或其类似物为AMG416或其类似物

步骤(2)：采用色谱分离法制备纯化多肽或其类似物水溶液，收集目的峰，合并后将溶液冻干或进一步操作，得到高纯度多肽或其类似物精制品；

其中，色谱分离法的固定相为C18，流动相A为磷酸盐水溶液、甲酸盐水溶液或者乙酸盐水溶液中的一种或多种，流动相B为甲醇或者乙腈中的一种或多种，流动相A与流动相B的体积比为(80～100)：(0～20)，其中流动相B不为零。

本发明所述的高纯度多肽或其类似物制备方法中，流动相A选自磷酸盐、甲酸盐或者乙酸盐水溶液中的一种或多种，流动相B选自甲醇或者乙腈中的一种或多种；

本发明所述的高纯度多肽或其类似物制备方法中，流动相A与流动相B的体积比优选为(90～100)：(0～10)，其中流动相B不为零；进一步优选为(90～97)：(3～10)。

本发明中流动相A与流动相B的体积比为(80～100)：(0～20)，若流动相A与流动相B的体积比大于上述的范围，则样品可能会吸附在柱子上，无法洗脱下来；若流动相A与流动相B的体积比小于上述的范围，则样品保留时间过短，样品存在被直接洗脱下来的风险，导致无法纯化。因此，本发明中流动相A与流动相B的体积比为(80～100)：(0～20)是合适的，且优选为(90～100)：(0～10)，更优选为(90～97)：(3～10)。