[发明专利]提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法

权利要求书

1.一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于：该培养液包括mSOFaa液，所述mSOFaa液包括SOF基础培养基以及添加物，SOF基础培养基包括体积分数为0.28～0.285％的乳酸钠及30～35mg/L的丙酮酸钠，添加物包括4～8mg/mL的BSA。

2.根据权利要求1所述一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于：每100mL SOF基础培养基包括0.6294g的NaCl、0.0534g的KCl、0.162g的KH₂PO₄、0.0172g的CaCl₂·2H₂O、0.00996g的MgCl₂·6H₂O、0.2106g的NaHCO₃、0.003～0.0035g的丙酮酸钠以及28～28.5μL的乳酸钠；所述添加物包括BME、MEM、谷氨酰胺、BSA、庆大霉素及头孢霉素，其中，BME的体积分数为2％，MEM的体积分数为1％，谷氨酰胺的浓度为1mmol/L，BSA的浓度为4～8mg/mL，庆大霉素的浓度为50μg/mL，头孢霉素的浓度为50μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于：所述添加物还包括体积分数为1～10％的血清替代物。

4.根据权利要求3所述一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于：所述血清替代物选自KSR。

5.根据权利要求3所述一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于：所述血清替代物于胚胎培养至2-细胞时期之后再加入培养体系中。

6.一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养方法，其特征在于：该培养方法包括以下步骤：

将牛克隆重组胚、牛体外受精胚或者处于一定胚胎发育时期的自体外获得的牛胚胎置于mSOFaa液中进行培养；牛克隆重组胚、牛体外受精胚培养至第78～100h，或者，所述牛胚胎已经发育至2-细胞时期之后向mSOFaa液中加入血清替代物，然后继续培养，mSOFaa液中添加的血清替代物的体积分数为1～10％。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述mSOFaa液包括SOF基础培养基以及添加物，SOF基础培养基包括体积分数为0.28～0.285％的乳酸钠及30～35mg/L的丙酮酸钠，添加物包括4～8mg/mL的BSA。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：每100mL SOF基础培养基包括0.6294g的NaCl、0.0534g的KCl、0.162g的KH₂PO₄、0.0172g的CaCl₂·2H₂O、0.00996g的MgCl₂·6H₂O、0.2106g的NaHCO₃、0.003～0.0035g的丙酮酸钠以及28～28.5μL的乳酸钠；所述添加物包括BME、MEM、谷氨酰胺、BSA、庆大霉素及头孢霉素，其中，BME的体积分数为2％，MEM的体积分数为1％，谷氨酰胺的浓度为1mmol/L，BSA的浓度为4～8mg/mL，庆大霉素的浓度为50μg/mL，头孢霉素的浓度为50μg/mL。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述血清替代物选自KSR。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养方法具体包括以下步骤：将500μL mSOFaa液加入至培养容器中，然后将30～40个牛克隆重组胚或牛体外受精胚置入该培养容器中，然后在38.5℃、5％CO₂、7％O₂以及饱和湿度条件下进行培养，培养至第96h时向所述培养容器中加入KSR，mSOFaa液中添加的KSR的体积分数为5％，然后继续培养至第8天。