[发明专利]用汉逊酵母表达系统产生HPV6L1蛋白的方法

权利要求书

1.一种产生表达人乳头瘤病毒6型L1(HPV6 L1)蛋白的重组汉逊酵母细胞的方法，其包含以下步骤：

a)通过将包含编码HPV6 L1蛋白的核苷酸序列的外源多核苷酸插入载体来构建表达构建体；

b)用步骤a)中获得的表达构建体转化汉逊酵母细胞；和

c)对步骤b)中获得的汉逊酵母细胞进行筛选，获得含有所述外源多核苷酸的重组汉逊酵母细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述HPV6 L1蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO：1。

3.权利要求2的方法，其中所述编码HPV6 L1蛋白的核苷酸序列示于SEQ ID NO：4。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中在所述表达构建体中所述外源多核苷酸可操纵地连接于启动子和终止子。

5.权利要求4的方法，其中所述启动子是MOX启动子或FMD启动子。

6.权利要求4或5的方法，其中所述终止子是MOX终止子。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述载体包括SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中步骤b)中通过电穿孔来转化汉逊酵母细胞。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中步骤b)中的所述汉逊酵母细胞是ATCC26012汉逊酵母细胞。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述重组汉逊酵母细胞含有多拷贝的所述外源多核苷酸。

11.一种根据权利要求1-10任一项的方法产生的重组汉逊酵母细胞。

12.一种产生HPV6 L1蛋白的方法，包括以下步骤：

i)在适于所述HPV6 L1蛋白表达的条件下培养权利要求11的重组汉逊酵母细胞；和

ii)从培养物中回收并纯化所述HPV6 L1蛋白。

13.权利要求12的方法，其还包括对所纯化的HPV6 L1蛋白进行解聚和重聚的步骤。

14.根据权利要求12或13的方法产生的HPV6 L1蛋白在制备用于预防HPV6感染的疫苗中的用途。

15.编码HPV6 L1蛋白的多核苷酸，其包含SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

16.一种表达构建体，其通过将编码HPV6 L1蛋白的核苷酸序列插入至序列示于SEQ ID NO：15的表达载体pRMHP2.1中获得。