[发明专利]一种制备利拉鲁肽的方法

说明书

本发明公开了一种固相法制备利拉鲁肽的方法，包括通过Glu侧链羧基进行固相支载，合成氨基酸树脂Fmoc‑Glu(Resin)‑OAll；以Fmoc‑Glu(Resin)‑OAll为起始树脂合成肽树脂中间；偶联片段，制得利拉鲁肽肽树脂；利拉鲁肽肽树脂经酸性条件裂解、HPLC纯化、冷冻干燥后制得高纯度利拉鲁肽。本发明所采用的支载方法由于Glu侧链相对较长，从而起到了肽链和树脂间连接桥(Linker)的作用，增加了肽链与树脂之间的柔性。使肽链更容易变形而降低反应位阻，从而提高合成反应效率。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种利拉鲁肽的制备方法。。

背景技术

糖尿病是一种全球性疾病，据报道2014年全球共有糖尿病患者 4.22亿人，约占全球人口的8.5％，其中II型糖尿病占约90％。利拉鲁肽是一种用于治疗II型糖尿病的人胰高血糖素样-1(GLP-1)的修饰物，具有GLP-1受体激动作用，在分子结构、生物活性、作用靶点及免疫原性等方面与GLP-1相似。利拉鲁肽属于新一代肠促胰岛素降血糖药物，作用时间长，并可能对多种心血管危险因素具有正面作用。利拉鲁肽的上市为患者增加了一种更人性化的降糖治疗选择。利拉鲁肽英名为Liraglutide，其结构式为：

利拉鲁肽分子结构与GLP-1(7-37)具有97％同源性。不同处在于以 Arg替代Lys³⁴；Lys²⁶侧链氨基经过N^α-棕榈酰经过γ-谷氨酰化。长链脂肪酸侧链可以使利拉鲁肽在血液中与白蛋白可逆性地结合，从而降低了被DPP-IV水解的速率和肾清除率，从而延长生物半衰期到 11～15h，每天只需皮下注射一次，提高了患者的顺应性。

利拉鲁肽由诺和诺德公司通过基因重组技术和化学修饰生产并上市，专利CN1271086A、CN1951965A、CN100569798A。

专利CN102286092A、CN103145828A、CN103980358A、 CN103304660A等记载了通过固相氨基酸偶联法合成利拉鲁肽,此类方法操作简单，但面临肽树脂增长过程中，困难序列形成导致合成效率低下的缺点，所得粗品纯度低、纯化操作步骤多且杂质不易控制等问题，且合成周期相对较长。

专利CN102875665A、CN104045705A、CN103304659A、 CN103864918A、CN104004083A、WO2016/067271A1等公开了通过片段法结合固相法合成利拉鲁肽，该固相法合成利拉鲁肽都是通过主链碳端氨基酸Gly支载于固相树脂。此类方法合成的利拉鲁肽粗品相对容易纯化，且合成周期有所缩短。但由于其固相树脂支载位置，处于肽链碳端位置，使得整条肽链更易扭曲、空间位阻增大而造成后续偶联效率下降。

专利CN103864918A、WO2014/199397A2等则通过固相法合成片段，然后在液相中，进行片段组合连接合成利拉鲁肽。此类方法合成利拉鲁肽粗品容易纯化，生产周期较短，但前期片段合成和纯化工作量巨大。

发明内容：

本发明的目的是结合现有化学合成技术各项优点，提供一种首次将固相树脂支载于利拉鲁肽21位Glu侧链羧基上进行利拉鲁肽肽树脂的固相法合成，使固相树脂载体处于肽链接近中部位置，示意图如图3所示。

如背景技术所述，现有固相合成利拉鲁肽的技术，都是将树脂支载于肽链碳端进行接肽反应合成利拉鲁肽肽树脂，示意图如图4所示。

本发明所采用的支载方法由于Glu侧链相对较长，从而起到了肽链和树脂间连接桥(Linker)的作用，增加了肽链与树脂之间的柔性。使肽链更容易变形而降低反应位阻，从而提高合成反应效率。

为实现发明目的，本发明采取如下的技术方案：