[发明专利]检测O‑乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器及其检测方法

权利要求书

1.一种检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器包括：花菁5/生物素修饰的肽链；非放射性尿苷-乙酰葡萄糖胺，蛋白酶K和被链霉亲和素包被的量子点。

2.根据权利要求1所述检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器，其特征在于，所述花菁5/生物素修饰的肽链为：

Biotin-Ser-Thr-Pro-Val-Ser-Arg-Ala-Asn-Met-Lys-Cy5。

3.根据权利要求书1或2所述纳米传感器的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.由糖供体尿苷-乙酰葡萄糖胺的糖基将花菁5/生物素修饰的肽糖基化；

S2.蛋白酶K区分糖基化和非糖基化肽；

S3.糖基化的肽通过链霉亲和素和生物素的相互作用自组装到量子点表面形成量子点-肽-花菁5的纳米结构和后续的荧光共振能量转移信号的测量。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1的操作步骤为：含有2-3微摩尔每升的花菁5/生物素修饰的肽，90-100微摩尔每升的尿苷-乙酰葡萄糖胺，0.01-0.1单位的碱性磷酸酶，待测的OGT和10×反应缓冲液，组成总体积为20微升的反应溶液中在37℃下温育1个小时；所述反应缓冲液由500毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷，200毫摩尔每升的氯化钙，0.5％吐温-20和0.5％NP-40组成，pH值为7.8。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作步骤为：含有2.4微摩尔每升的花菁5/生物素修饰的肽，96微摩尔每升的尿苷-乙酰葡萄糖胺，0.05单位的碱性磷酸酶，待测的OGT和10×反应缓冲液，组成总体积为20微升的反应溶液中在37℃下温育1个小时。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2的操作步骤为：将1-2纳克蛋白酶K加入到糖基化反应产物中，反应总体积为30微升的系统，在50-60℃下反应1-3小时。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作步骤为：将1.5纳克蛋白酶K加入到糖基化反应产物中，反应总体积为30微升的系统，在55℃下反应2小时。

8.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3的操作步骤为：取20-40微升步骤S2的反应产物用5-15纳摩尔每升量子点在100微升的培养缓冲液中在室温下反应10-30分钟，形成量子点-肽-花菁5的纳米结构；其中，所述培养缓冲液由：3毫摩尔每升的氯化镁，100毫摩尔每升的pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷-盐酸和10毫摩尔每升的硫酸铵组成，pH值为8.0。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3的具体操作步骤为：取30微升步骤S2的反应产物用10纳摩尔每升量子点在100微升的培养缓冲液中在室温下反应20分钟，形成量子点-肽-花菁5的纳米结构。

10.根据权利要求1或2所述纳米传感器在酶动力学参数的测量、OGT抑制剂的筛选以及细胞OGT活性的定量检测方面的应用。