[发明专利]一种快速区分PCV2型和PCV3型的多重PCR检测引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201711128720.6 | 申请日： | 2017-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN107653347A | 公开（公告）日： | 2018-02-02 |
| 发明（设计）人： | 焦文强;徐引弟;王治方;王克领;师志海;张青娴;白献晓;朱文豪;许峰 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙)41122 | 代理人： | 徐文婷 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 区分 pcv2 pcv3 多重 pcr 检测 引物 试剂盒 | ||
1.一种快速区分PCV2型和PCV3型的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述的引物组包括引物L1、L2、L3，其中：
L1：5’-TGTATCTCGCATGTGCAAGGGTACG-3’
L2：5’-TTCGAAGTTACTTAAGATGTAT-3’
L3：5’-ACCCACCCAATAAATACCCACACC-3’。
2.一种如权利要求1所述的引物组在制备猪圆环病毒分型检测试剂盒中的应用。
3.一种包含权利要求1所述的引物组的猪圆环病毒分型检测试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括核酸提取试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、L1引物、L2引物、L3引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5pmol/μL dNTP 4.0μL、25pmol/μL L1引物1.0μL、25pmol/μL L2引物1.0μL、25pmol/μL L3引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，补加双蒸水至50μL。
7.一种如权利要求3-6任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括核酸提取、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。
8.根据权利要求7所述的的试剂盒的使用方法，其特征在于，还包括对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析：当扩增片段为1326bp，则样本中的圆环病毒为PCV2型；当扩增片段大小为758bp，则样本中的圆环病毒为PCV3型。
9.根据权利要求7所述的的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸2min，共35个循环；72℃最后延伸10min。
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