[发明专利]一种富含绿原酸类物质金银花细胞的生产方法

说明书

本发明涉及一种富含绿原酸类物质金银花细胞的生产方法，该方法包括预处理、消毒、配制培养基、愈伤组织、继代培养、金银花细胞悬浮培养体系建立与后处理等步骤。本发明方法生产的产品绿原酸酸类物质含量高达9.68％以上，与现有生产方法自然金银花花蕾绿原酸含量4.82～4.84％(李淼，王永香，孟谨.HPLC法测定金银花中新绿原酸等8种成分的量[J].中草药，2014，45(7)：1006～1009)相比提高100～100.83％，生产周期缩短300～330天，通过成本核算确定成本降低70～80％。本发明方法易于实现工业化和自动化生产，便于广泛推广使用。

【技术领域】

本发明属于生物技术领域。更具体地，本发明涉及一种富含绿原酸类物质金银花细胞的生产方法。

【背景技术】

进入21世纪以来，健康成了人们追求的主题，人们崇尚自然、回归自然，利用现有的自然资源维持食品安全、防治疾病并保健康复身体，追求生命的自然健康，由此引发植物功能成分高效生产的研究热潮。

绿原酸，又叫咖啡酰奎宁酸(Cafeoylquinic acid)，是重要的植物次生代谢产物，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径形成的苯丙素类脂化合物家族，奎宁酸发生酯化因部位不同而分为3-O-咖啡酰奎宁酸(绿原酸)、4-O-咖啡酰奎宁酸(隐绿原酸)、5-O-咖啡酰奎宁酸(新绿原酸)、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸(异绿原酸B)、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸(异绿原酸A)、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸(异绿原酸C)等。绿原酸类物质为许多蔬菜、水果、饮品营养成分之一，也是众多药材(如金银花、茵陈、杜仲)以及中成药(如复肝宁、双花注射液、粉刺口服液)的主要有效成分和重要质量指标。

现代药理研究表明，绿原酸具有多种生物活性，例如抑菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤与预防心血管疾病作用。

在抑菌作用方面，Takahama(Takahama U,Tanaka M,Hirota S.Interactionbetween ascorbic acid and chlorogenic acid during the formation of nitricoxide in acidified saliva[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2008,56(21):10406-10413)研究发现咖啡酰奎宁酸可抑制口腔细菌的滋生，预防牙周炎、牙槽脓肿等口腔疾病，维护口腔环境的健康；Albouchi(Albouchi F,Hassen I,Casabianca H,Hosni K^*.Phytochemicals,antioxidant,antimicrobial and phytotoxic activitiesof Ailanthus altissima(Mill.)Swingle leaves[J].SouthAfrican Journal ofBotany,2013,87(7):164-174)发现富含绿原酸的椿嫩叶能较好地抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和白色念珠菌；熊建华等人(Xiong J H,Li S C,Wang W J,Hong Y P,Tang K J^*,Luo Q S.Screening and identification of the antibacterial bioactive compoundsfrom Lonicera japonica Thunb.Leaves[J].Food Chemistry,2013,138:327-333；杨鹏飞，熊建华.金银花叶二-O-咖啡酰奎宁酸在肉品保鲜中的应用及其复合保鲜剂的开发[D].江西农业大学,2014)认为金银花叶中提取的咖啡酰奎宁酸类物质抑菌效果较好，对肉品有一定防腐作用，可延长冷藏猪肉、鸭肉保质期。