[发明专利]从宿主细胞提取和纯化腺相关病毒和腺病毒的方法及其组分和试剂盒

权利要求书

1.一种从包装细胞的样品中提取重组的腺相关病毒（AAV）或腺病毒（AdV）的病毒颗粒的方法，所述方法包括：

用碱性裂解溶液使细胞裂解，具体是在样品中加入碱性裂解溶液，使得样品含有0.1%至1%的洗涤剂并且对于AAV的pH为9.0 至11.5而对于AdV的pH为9.0 至10.5，从而使所述细胞裂解；

用盐析溶液沉淀并去除宿主细胞的蛋白杂质，具体是在细胞裂解之后的样品中加入盐析溶液，使得样品含有0.5 M 至2.0 M 的盐并且pH 为4.0 至7.0，从而使宿主细胞的蛋白沉淀；

移除被沉淀的蛋白，以获得含有所述病毒颗粒的上清液；然后

通过将包含聚乙二醇的沉淀溶液加入至移除被沉淀的蛋白之后的样品，使得样品包含5%至12%的聚乙二醇（PEG），从而使所述病毒颗粒沉淀并保存；以及

将沉淀的病毒颗粒进一步层析纯化；

其中所述洗涤剂选自脱氧胆酸盐、辛基硫代葡萄糖苷、辛基葡萄糖苷、十二烷基麦芽糖苷、烷基硫酸盐、聚山梨醇酯20（吐温-20）、Tergitol 型NP-40和十二烷基硫酸钠（SDS）中的一种或多种；

除了所述洗涤剂之外，所述碱性裂解溶液还包括选自以下的一种或多种试剂：N-环己基-3-氨基丙磺酸（CAPS）、甘氨酸钠、磷酸钠；

所述盐析溶液包含的盐选自乙酸钠、乙酸钾、磷酸钠中的一种或多种；

所述层析使用的是基于二氧化硅的层析柱或树脂层析柱。

2.根据权利要求1 所述的方法，其中所述病毒颗粒是腺相关病毒血清型1-11 中的任何一种或者腺病毒类型A-G 中的任何一种。

3.根据权利要求1 所述的方法，其中所述层析使用的是离子交换层析柱。

4.根据权利要求1 所述的方法，其中所述洗涤剂是脱氧胆酸盐。

5.根据权利要求1 所述的方法，其中所述洗涤剂是脱氧胆酸盐和十二烷基硫酸钠（SDS）。

6.根据权利要求1 所述的方法，其中所述PEG 的平均分子量为3000 至10000。

7.根据权利要求1 所述的方法，其中所述方法不包括超速离心的使用。

8.根据权利要求1 所述的方法，其中所述方法不包括通过冻结-解冻循环进行的提取。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法不包括亲和层析的使用。

10.一种从含有包装病毒颗粒的细胞的样品中提取重组的腺相关病毒（AAV）或腺病毒（AdV）的病毒颗粒的方法，所述方法包括：

通过将碱性裂解溶液加入至所述样品，使得样品包含0.1%至1%的洗涤剂并且对于AAV的pH为9.0 至11.5而对于AdV的pH为9.0 至10.5，使所述细胞裂解；然后

通过将盐析溶液加入至细胞裂解之后的样品，使得样品包含0.5 M 至2.0 M 的盐并且pH 为4.0 至7.0，从而使释放自被裂解的细胞的蛋白沉淀，其中所述盐选自乙酸钠、乙酸钾、磷酸钠中的一种或多种；然后

移除被沉淀的蛋白，以获得含有所述病毒颗粒的上清液；然后

通过将包含聚乙二醇的沉淀溶液加入至移除被沉淀的蛋白之后的样品，使得样品包含5%至12%的聚乙二醇（PEG），从而使所述病毒颗粒沉淀；并且然后

将沉淀的病毒颗粒进一步层析纯化；

其中所述方法不包括超速离心或冻结-解冻循环的使用；

其中所述洗涤剂选自脱氧胆酸盐、辛基硫代葡萄糖苷、辛基葡萄糖苷、十二烷基麦芽糖苷、烷基硫酸盐、聚山梨醇酯20（吐温-20）、Tergitol 型NP-40和十二烷基硫酸钠（SDS）中的一种或多种；

除了所述洗涤剂之外，所述碱性裂解溶液还包括选自以下的一种或多种试剂：N-环己基-3-氨基丙磺酸（CAPS）、甘氨酸钠、磷酸钠；

所述层析使用的是基于二氧化硅的层析柱或树脂层析柱。