[发明专利]一种D-二聚体检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，包括：

（1）校准品；

（2）试剂R1；

（3）酶结合物工作液R2；

（4）磁珠结合物工作液M；

（5）清洗液；

（6）化学发光底物；

所述酶结合物的主要成分是碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体；

所述磁珠结合物的主要成分是D-二聚体包被抗体偶联的羧基磁珠，所述羧基磁珠的粒径为1.3~4μm；

所述D-二聚体包被抗体偶联的羧基磁珠是通过将D-二聚体包被抗体溶液与羧基磁珠溶液按照质量比为1:（80~120）混合，于室温条件下在pH为5.0的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中交联反应16~24h得到；所述D-二聚体包被抗体溶液的浓度为1~5mg/mL；所述羧基磁珠溶液的浓度为100mg/mL；

所述试剂R1由如下成分组成：25~100mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、150mmol/L NaCl、1~5%蔗糖、1~5%甘油、0.1%牛血清白蛋白、0.4~2mmol/L咪唑、0.05~0.2%吐温20和0.05~0.2%Proclin300，pH为7.0~7.5。

2.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述校准品是在校准品稀释液中加入D-二聚体配制而成，所述校准品稀释液包括：20~50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、150~300 mmol/L NaCl、1%牛血清白蛋白、0.5~5mmol/L Proclin300，pH为7.0~7.5。

3.根据权利要求1或2所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述酶结合物工作液R2的浓度为0.5~2μg/mL，由酶结合物溶液加入酶结合物稀释液配制而成，其中，所述酶结合物稀释液包括：20~50 mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸、150~300mmol/L NaCl、1%牛血清白蛋白、5%蔗糖、5%甘油、0.1%吐温20、0.05~5mmol/LZnCl₂、0.05~5mmol/LMgCl₂、0.05~0.2%Proclin300，pH为6.0~6.5。

4.根据权利要求1或2项所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠结合物工作液M的浓度为0.1~0.5mg/mL，由磁珠结合物溶液加入磁珠结合物稀释液配制而成，其中，所述磁珠结合物稀释液包括：20~50mmol/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸、150~300mmol/L NaCl、1%牛血清白蛋白、1%蔗糖、1%明胶、0.1%吐温20、1%聚乙烯吡咯烷酮、0.5~5%Proclin300，pH为5.5~6.5。

5.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的D-二聚体标记抗体是通过将活化的D-二聚体标记抗体与活化的碱性磷酸酶按摩尔比为1：（1~2）混合，于2~8℃环境下在pH为7.3的三乙醇胺缓冲液中反应18~24h得到。

6.根据权利要求5所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述活化的D-二聚体标记抗体是通过将Traut’s溶液与D-二聚体标记抗体溶液按摩尔比为1：（15~30）混合，于室温条件下在pH为8.5的三乙醇胺缓冲液中反应12~18min得到；所述活化的碱性磷酸酶是通过将4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液与碱性磷酸酶溶液按摩尔比为1：（10~15）混合，于室温条件下在N,N-二甲基甲酰胺溶液中反应12~18min得到。

7.根据权利要求6所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于，所述Traut’s溶液的浓度为1.3~1.5 mg/mL；所述D-二聚体标记抗体溶液的浓度为2~5 mg/mL；所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的浓度为16~18 mg/mL；所述碱性磷酸酶溶液的浓度为16~20mg/mL。